两栖类动物的皮肤裸露而且湿润,生活在有很多复杂微生物的环境中,但是两栖类动物能够适应这种生活环境,因为两栖类动物皮肤是一个天然屏障,能够从特定的腺体分泌防御物质来抵御外界环境中微生物和其他病原体的入侵。两栖类动物的皮肤是一个多功能的器官,在液体平衡、水分调节、呼吸作用、温度控制、排泄、生殖和抗菌防御中发挥作用。保护皮肤免受微生物的入侵对于个体和群体的生存是必不可少的。在应激反应或捕食攻击中,两栖类动物高度专化的皮肤结构(即毒液或颗粒腺)能分泌一些复杂的化学混合物,这些分泌物含有很多生物活性成分,包括生物碱,生物胺,肽和蛋白质。中国林蛙(Rana chensinensis)主要分布在东北地区,本实验选用中国林蛙作为实验对象。我们应用三种方法来获取中国林蛙的皮肤分泌物,分别为乙醚熏蛙法、电刺激蛙法和蛙淋巴囊注射盐酸去甲肾上腺素法。这三种刺激方法都可使中国林蛙皮肤腺产生大量的分泌物。对三种不同方法获取的皮肤分泌液分别进行了比较蛋白质组学研究,利用双向电泳技术从蛋白混合物中分离蛋白,再通过质谱技术对所得到的蛋白点进行分析和鉴定。结果发现,三种方法获取的中国林蛙皮肤分泌物蛋白的种类和表达量有所不同,在其中我们主要发现了激素原转化酶1、苯丙氨酰-tRNA合成酶、酪氨酸蛋白激酶、组氨酸激酶、蛋白磷酸酶调节亚基、肌动蛋白、磷酸甘油酸激酶、巨噬细胞移动抑制因子以及醛酮还原酶等,这些蛋白在中国林蛙皮肤免疫防御过程中都发挥了一定作用。我们期待从蛋白质表达水平上对中国林蛙皮肤分泌物的功能和它们在免疫防御过程中发挥的作用进行初步的研究,为今后两栖类皮肤分泌物中的免疫防御相关蛋白在抗感染、抗肿瘤、抗病毒与新型抗生素等创新药物的开发研究中奠定基础。