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[目 的]腹膜透析(Peritoneal dialysis,PD)是终末期肾脏病(End stage renal disease,ESRD)患者肾脏替代治疗的重要手段。长期PD患者,腹膜纤维化(Peritoneal fibrosis,PF)随着PD进行而出现,并稳步进展,最终导致腹膜功能障碍,其特征是发生腹透液侧与血液侧快速的小分子转运和超滤量减少。人腹膜间皮细胞分泌磷脂酰胆碱(Phosphatidylcholine,PC),在腹膜表面形成一层保护层,保护腹膜组织结构和功能的完整性。研究发现PD高转运患者透析液中磷脂(Phospholipids,PLs)丢失显著增多,提示腹膜表面PLs层与腹膜功能相关。本研究通过腹腔注射4.25%葡萄糖腹透液建立大鼠腹膜纤维化模型,旨在探讨在PD过程中,腹膜表面活性脂质层的变化与PF之间的关系。[方 法]选取24只雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠,随机分为四组,每组6只,分别为NS组、PD2W组、PD4W组、PD6W组,适应性喂养1周后,PD组大鼠给予4.25%葡萄糖(100ml/kg)腹膜透析液分别腹腔注射2、4、6周,NS组大鼠给予0.9%生理盐水(100ml/kg)腹腔注射。在注射完成48小时后行腹膜平衡试验(Peritoneal equilibrium test,PET)观察腹膜小溶质转运特性和超滤量的变化;留取腹膜组织,用超高液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC)技术分析腹膜表面脂质组成及含量变化;取各组大鼠腹膜组织作石蜡切片后进行MASSON染色,在电子显微镜下观察腹膜组织形态学变化;采用免疫组化法检测各组大鼠腹膜组织转化生长因子β 1(Transforming growth factor β1,TGF β-1)和 Smad2/3 表达量评估 PF 情况。[结 果]1.随着PD进行,腹膜表面脂质不断丢失,其中三酰甘油(Triacylglycerol,TAG)、PC、磷脂酰乙醇胺(Phosphatidylethanolamine,PE)、磷脂酰甘油(Phosphatidylglycerol,PG)、鞘磷脂(sphingomyelin,SM)、磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)在不同透析时长组大鼠腹膜中的变化有统计学意义。大鼠腹膜组织表面TAG含量组间比较结果显示,与PD2W组相比,PD4W组(p=0.010)和PD6W组(p=0.008)显著减少;PC含量组间比较发现,与NS组相比,PD4W组(p=0.015)和PD6W组(p=0.009)显著减少;PE含量组间比较,与NS组相比,PD4W组(p=0.026)和PD6W组(p=0.006)显著减少;PG含量组间比较,与PD2W组相比,PD4W组(p=0.029)和PD6W组(p=0.007)显著减少;SM含量组间比较,与NS组相比,PD4W组(p=0.015)和PD6W组)(p=0.009)显著减少;PS含量组间比较,与NS组相比,PD2W组(p=0.015)和PD6W组(p=0.002)显著减少。而溶血磷脂酰胆碱(Lysophosphatidylcholine,LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(Lysophosphatidylethanolamine,LPE)、磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositol,PI)、二酰甘油(diacylglycerol,DAG)的含量变化无统计学意义。2.行PET检查评估腹膜功能的改变,发现随着PD进行,溶质转运速度显著增加,超滤量显著减少(p<0.01)。D/Palb组间比较,与NS组相比,PD6W组显著增高(0.388±0.184Vs 0.044±0.009,p=0.035);与PD2W组相比,PD6W组显著增高(0.388±0.184Vs 0.048±0.027,p=0.035)。D/Ptp 组间比较,PD4W组和 PD6W 组均高于 NS 组(0.185±0.057Vs 0.057±0.011,p=0.014,0.306±0.103 Vs 0.057±0.011,p=0.011),PD6W组明显高于 PD2w组(0.306±0.103 Vs 0.094±0.064,p=0.014)。与 NS 组相比,PD2W 组、PD4W 组、PD6W 组的 D4/D0显著降低(0.28±0.07Vs 0.60±0.09,p<0.01;0.16±0.02 Vs 0.60±0.09,p<0.01;0.17±0.02Vs 0.60±0.09,p<0.01)。超滤量组间比较,与 NS 组相比,PD2W 组、PD4W 组和 PD6W 组均显著降低(0.85±5.68 Vs 8.50±4.36,p=0.025;-4.90±3.49Vs 8.50±4.36,p<0.01;-15.89±2.87Vs 8.50±4.36,p<0.01);与 PD2W 组相比,PD6W 组显著降低(-15.89±2.87 Vs 0.85±5.68,p<0.01)。3.腹膜组织行MASSON染色结果显示:正常对照组大鼠腹膜组织结构完整,间皮下基质较薄;PD组大鼠腹膜组织结构疏松,间皮细胞有变性及部分脱落,间皮下基质增厚和胶原沉积。各组腹膜组织厚度两两比较结果显示:与NS组相比,PD2W 组、PD4W 组和 PD6W 组显著增厚(37.90±2.55 Vs 29.38±1.82,p<0.01;55.81±3.95 Vs 29.38±1.82,p<0.01);与PD4W组相比,PD6W组显著增厚(55.81±3.95 Vs 37.90±2.55,p<0.29.38± 1.82 Vs 7.99±0.21,p<0.01;37.90±2.55Vs 7.99±0.21,p<0.01;55.81±3.95Vs 7.99±0.21,p<0.01);与PD2W组相比,PD4W组和PD6W组显著增厚(37.90±2.55 Vs 29.38±1.82,p<0.01;55.81±3.95 Vs 29.38±1.82,p<0.01);与PD4W组相比,PD6W组显著增厚(55.81±3.95 Vs 37.90±2.55,p<0.01)。4.免疫组化结果显示:随着PD进行,腹膜表面TGFβ-1和Smad2/3的表达不断增加(p<0.01)。TGFβ-1组间比较结果显示:与NS组相比,PD4W组和 PD6W 组显著增高(0.0087±0.0024 Vs 0.0038±0.0003,p=0.024;0.0166±0.0014 Vs 0.0038±0.0003,p<0.01);与 PD2W 组相比,PD4W 组和 PD6W 组显著增高(0.0087±0.0024 Vs 0.0045±0.0010,P=0.039;0.0166±0.0014 Vs 0.0045±0.0010,P<0.01);PD6W 组明显高于 PD4W 组(0.0166±0.0014 Vs 0.0087±0.0024,P=0.001)。Smad2/3组间比较结果显示:与NS组相比,PD2W组、PD4W组和 PD6W 组显著增高(分别为 0.0030±0.0007 Vs 0.0016±0.0006,P=0.014;0.0081±0.0002 Vs 0.0016±0.0006,P<0.01;0.0114±0.0026 Vs 0.0016±0.0006,P=0.001);与 PD2W 组相比,PD4W 组和 PD6W 组显著增高(0.0081±0.0002 Vs 0.0030±0.0007,P<0.01;0.0114±0.0007 Vs 0.0030±0.0007,p=0.02)。[结 论]本实验通过4.25%高糖PD液腹腔注射建立腹膜纤维化大鼠模型后,我们发现随着PD进行,大鼠腹膜表面脂质不断丢失增加,同时伴随着腹膜纤维化加重,以及溶质转运速率增加和超滤减少。提示腹膜透析导致的腹膜表面脂质丢失可能是腹膜纤维化的诱因。