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目的:利用网络药理学方法及分子对接技术以探讨红景天苷(salidroside,Sal)治疗慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)的潜在分子机制,再通过构建肺气肿小鼠模型,以验证红景天苷对肺气肿小鼠肺组织细胞焦亡的影响。方法:(1)红景天干预COPD作用机制的网络药理学研究:通过质谱分析筛选红景天的活性成分,通过Drugbank、Therapeutic Target、Swiss Target Prediction数据库预测红景天有效成分的作用靶点;通过GEO数据库筛选与COPD相关的数据集,建立COPD靶点数据库;对红景天活性成分与COPD交集靶点构建蛋白质-蛋白质互作(Protein-protein interaction network,PPI)网络并筛选出重要的枢纽(hub)基因;通过基因本体论(Gene Ontology,GO)分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析,基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA),探讨与潜在靶基因相关的生物学功能,构建红景天活性成分-靶点-通路图。利用基因差异分析在COPD和正常对照组中进一步验证Hub基因,并通过分子对接模拟验证hub蛋白与Sal的结合活性。(2)红景天的活性成分Sal的体内研究。6周龄C57BL/J雄性小鼠48只按随机数字表法分为正常对照组(Control);肺气肿模型组(Model);Sal低中高剂量干预组[Model+(Sal 20mg/kg);Model+(Sal 40mg/kg);Model+(Sal 80mg/kg)];地塞米松(dexamethasone,Dex)组[Model+(Dex 2mg/kg)],每组8只。通过脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)气管滴注(第1、14天)联合烟雾(Cigarette smoke,CS)暴露(4周)方法构建肺气肿小鼠模型。在开始构建模型时,Sal干预组在Model基础上予腹腔注射Sal(低、中、高剂量组使用剂量分别为20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg,1次/日),Dex干预组在Model基础上予腹腔注射Dex(2mg/kg,1次/日)。Control组及Model组每日腹腔注入等量的生理盐水。在第29天进行标本采集,并完成相关检测:(1)取左肺组织染色进行病理分析:苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,H&E)染色,观察肺组织病理改变;(2)免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)染色,分析肺组织中细胞焦亡蛋白表达水平,并应用Image-Pro Plus 6.0软件计算阳性蛋白在肺组织中的面积百分比Area(%)。(3)采用酶联免疫吸附实验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测血清中焦亡相关炎症因子白介素-18(interleukin,IL-18)、白介素-1β(interleukin,IL-1β)表达水平。结果:(1)通过质谱分析结果共得到红景天的8个活性成分,包括苄基-β-D-吡喃葡萄糖苷、硫氰酸酯A,Sal等,通过靶点数据库共得到红景天活性成分靶点318个,通过GEO数据库筛选出COPD数据集GSE5058和GSE106986,将两个数据集取交集,共得到17299个共同靶点,共同靶点与红景天对应靶点取交集,得到232个共同靶点,将筛选得到的潜在作用靶点构建PPI网络,得到190个潜在靶点。潜在关键靶基因富集分析表明红景天具有水解酶活性、氧化还原酶活性等分子功能,参与了活性氧(Reactive oxygen species,ROS)代谢、氧化应激过程等。结合PPI网络分析、基因差异表达分析,最终获得Sal干预COPD的hub基因Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4),与细胞焦亡相关,分子对接提示其与活性成分Sal可形成较稳定的复合物,为体内实验验证提供了一定依据。(2)(1)各组小鼠病理形态学及病理分析比较:与Control组比较,Model组终末肺组织肺泡扩大,肺泡壁变薄,变薄的肺泡壁破裂融合形成肺大疱,Model组MLI明显升高(p<0.001),MAN明显下降(p<0.001),符合肺气肿小鼠病理特点,Sal各干预组及Dex组可改善肺气肿模型小鼠的肺泡病理形态,低中高剂量组Sal及Dex组MAN较Model组均明显升高(p<0.001),MLI较Model组明显降低,低剂量组Sal可达p<0.01,中高剂量组达p<0.001。(2)各组TLR4及其相关的焦亡蛋白Caspase-11、NLRP3、Caspase-1、GSDMD的area(%)比较:与Control组相比,Model组的TLR4、Caspase-11、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达水平明显升高(p<0.001)。与Model组相比,低剂量Sal组可降低TLR4蛋白表达(p<0.05),明显降低NLRP3、GSDMD蛋白表达水平(p<0.001),可降低Caspase-1、Caspase-11表达水平,但差异不具有统计学意义(p>0.05);中高剂量Sal组和Dex组可明显降低TLR4、Caspase-11、Caspase-1、NLRP3、GSDMD蛋白表达水平(p<0.001)。(3)各组小鼠血清IL-1β、IL-18水平:与Control组比较,Model组血清中IL-1β、IL-18表达水平明显升高(p<0.001),Sal低中高剂量干预组和Dex组明显降低IL-1β、IL-18的表达水平(p<0.001)。结论:(1)通过网络药理学结果表明,红景天的关键活性成分Sal可作为COPD潜在的干预药物。(2)通过网络药理学及分子对接筛选出TLR4是Sal干预COPD的重要靶点,与细胞焦亡相关。(3)通过动物实验结果表明,TLR4相关焦亡蛋白及炎症因子参与了小鼠肺气肿的发生和炎症反应,Sal通过抑制肺组织细胞焦亡抑制了小鼠肺气肿发生。