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研究背景与目的:在全球范围内膀胱癌是第二常见的泌尿系肿瘤,其约57万/年的新增病例,以及21万/年的死亡病例对人类健康造成巨大威胁,关于膀胱癌的发病机制尚无定论,但可以肯定的是复杂的环境因素以及遗传易感性在膀胱癌的发生发展中起到了不可忽视的作用。而膀胱癌发病情况的隐匿性导致患者无法在疾病早期得到明确诊断和有效的治疗,从而延误病情。即使接受了手术和灌注化疗后仍有较高的复发风险和进展风险,因此深入挖掘新型生物分子构建风险预后模型,可用于准确判断患者预后情况,有利于采取更加有效的治疗手段。随着测序技术和转录组分析的发展,越来越多的学者将目光投向了miRNA这一生物分子,已有大量的研究证实体内miRNA的表达失调可导致肿瘤相关基因表达水平改变,从而影响肿瘤疾病的发生发展,这些情况表明miRNA在膀胱癌早期诊断、判断预后及潜在治疗靶点的方面有巨大潜力。TCGA数据库内涵盖了绝大部分癌症相关基因组数据,且有大量完整的临床信息数据,因此本文拟从TCGA中挖掘与膀胱癌预后相关的miRNAs构建风险预后模型,为预测膀胱癌患者的预后风险提供依据。方法:从TCGA数据库下载膀胱癌相关数据,筛选出差异表达的miRNAs和mRNAs,利用单因素Cox回归分析、Lasso回归分析、多因素Cox回归分析,构建预后风险模型,根据危险系数计算每个患者的风险评分。在测试组、对照组和总数据集中根据风险得分中位值划分高低风险组进行K-M生存分析,ROC曲线用于检测风险评分模型三个组别中预测效能。然后将患者临床信息与风险评分共同纳入单因素分析,多因素分析,判断构建出的风险预后模型能否作为影响膀胱癌患者的独立预后因素。接着预测模型中目标miRNAs的靶基因进行GO与KEGG富集分析,最后收集我院确诊膀胱癌患者的肿瘤组织及癌旁组织标本进行q RT-PCR验证差异分子的表达情况。结果:在418例膀胱肿瘤样本与19例正常膀胱组织样本中共筛选出473个差异表达miRNAs,6767个差异表达mRNAs。所有患者随机分为train组和test组,train组中单因素Cox回归分析结果显示共18个miRNAs与膀胱癌患者总生存期相关,随后Lasso回归分析最终得到15个miRNAs。多因素Cox分析后得到6个miRNAs,共同组成风险预后模型,风险评分计算公式为:风险评分Risk Score=Exphsa-miR-145-3p×0.653+Exphsa-miR-28-5p×-1.050+Exphsa-miR-33a-5p×0.472+Exphsa-miR-590-3p×-0.609+Exphsa-miR-3065-3p×0.218+Exphsa-miR-6728-5p×0.294。根据Risk Score中位值将患者分为高低风险组,在train、test组和总数据集中绘制K-M生存曲线和ROC曲线,结果显示在三个组别中高风险组总生存率均低于低风险组,P＜0.05,ROC曲线AUC值分别为0.848、0.751、0.791,准确性良好。独立预后分析显示,预后风险模型是影响膀胱癌预后的独立危险因素,P＜0.001。通过miRDB、target Scan以及miRTar Base三个靶基因预测网站对6-miRNAs进行靶基因预测,结合差异表达miRNAs和mRNAs文件,对靶基因进行筛选,最终获得符合对应关系的靶基因共521个,GO富集结果显示靶基因分子功能主要体现在影响DNA结合转录激活因子活性、RNA聚合酶Ⅱ特异性、细胞离子通道活动等方面,参与肌肉系统进程,负调控细胞迁徙、运动以及细胞内成分改变等生物过程。KEGG通路富集结果显示,靶基因主要集中在c GMP/PKG3、PI3K/Akt、MAPK等肿瘤相关信号通路中。在20例膀胱癌患者的膀胱肿瘤及正常膀胱组织中进行q RT-PCR,实验结果显示hsa-miR-145-3p在肿瘤组织中低表达,在癌旁组织中高表达（0.524±0.613 VS1.035±0.186 P=0.001）,而hsa-miR-33a-5p（2.162±1.941 VS 0.968±0.268P=0.01）、hsa-miR-3065-3p（2.824±1.741 VS 0.992±0.216 P＜0.001）、hsa-miR-6728-5P（3.291±3.353 VS 1.077±0.411 P=0.006）在肿瘤组织中高表达,在正常组织中低表达,差异均有统计学意义。结论:1.基于TCGA数据库成功构建了6-miRNAs风险评分模型,且预测准确度良好。2.该模型是影响膀胱癌患者预后的独立危险因素。3.膀胱肿瘤组织和正常膀胱组织中miR-145-3p、miR-33a-5p、miR-3065-3p、miR-6728-5p差异表达,可能是潜在的生物标志物。4.6-miRNAs所对应的靶基因功能富集结果显示与肿瘤的发生发展过程密切相关。