基于微孔板的化学发光法检测孔雀石绿和结晶紫的研究

来源 :广东工业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:yangzi_job
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孔雀石绿和结晶紫是致癌、致畸、致突变的“三致”化合物。尽管大部分国家和地区包括中国已经将其列为水产兽医产业的禁用药,但是在利益的驱使下,仍有不法商人在水产品的养殖、运输和保鲜过程中使用。我国出口的水产品常被检测出孔雀石绿的残留,使我国水产品出口产业受到不小的打击。同时侧面反映出,我国的水土环境正在或将会遭到孔雀石绿和结晶紫的严重污染。因此,加大孔雀石绿和结晶紫的检测力度,是我国实现经济可持续发展的必然举措之一。目前常用的孔雀石绿和结晶紫残留的有效检测手段有高效液相色谱法、液-质联用法、酶联免疫分析法等,但这些方法样品预处理复杂,操作繁琐,材料仪器昂贵,不利于现场检测。因此,市场上亟待一种快速、灵敏的检测手段来监测水土环境孔雀石绿或结晶紫的污染。以luminol化学发光为基础的高灵敏度分析检测方法因具有检测限低、分析速度快、操作简单、线性范围长等突出优点,近年来吸引了研究人员的广泛关注。本论文首先研究孔雀石绿和结晶紫对Na2CO3-luminol-H2O2三元体系的化学发光强度的影响,并设计单因素实验和正交实验来对关键实验条件进行优化,分别绘制孔雀石绿和结晶紫浓度对Na2CO3-luminol-H2O2三元体系相对化学发光值的标准曲线,建立基于微孔板的化学发光检测法,并对4种加标的环境水样进行分析检测;制备了孔雀石绿和结晶紫的分子印迹聚合物(MG-MIPs, CV-MIPs),并用红外光谱、扫描电镜、平衡吸附实验和Scatchard分析对其进行表征;分别用MG-MIPs和CV-MIPs灌装成固相萃取小柱,萃取加标土壤样品中孔雀石绿和结晶紫,使用新建立的化学发光检测法对处理后的样品进行检测。然后成功建立基于Na2CO3-luminol-H2O2三元体系的微孔板化学发光检测孔雀石绿和结晶紫的方法。孔雀石绿浓度的对数值与相对化学发光值在2~800 ng·mL-1范围内呈良好的线性关系,R2=0.9954,检出限为0.76 ng·mL-1 (3a),4种加标的环境水样的回收率为90.4%-112.1%,相对标准偏差为2.7%~6.1%。结晶紫浓度的对数值与相对化学发光值在2~800 ng·mL-1范围内呈良好的现象关系,R2=0.9939,检出限为0.59 ng·mL-1 (3a),4种加标的环境水样的回收率为88.8%~106.2%,相对标准偏差为3.5%-10.9%。对于3种加标的土壤样品中孔雀石绿和结晶紫的回收率,与未用分子印迹固相萃取的实验结果对比,孔雀石绿的回收率从43.1%~57.9%提高至71.5%~83.3%,结晶紫的回收率从44.1%~62.5%提高至62.1%~84.0%,经过分子印迹固相萃取显著提高了加标样品的回收率。最后以孔雀石绿和结晶紫对Na2CO3-luminol-H2O2体系的化学发光均有显著抑制作用为基础,分别建立了针对孔雀石绿和结晶紫的化学发光检测方法,配合96孔化学发光微孔板和酶标仪辅助进样模块的使用,实现了单个待测样品的平行检测、多个样品同时检测以及标准溶液的同步检测,提高自动化程度,简化检测流程,为实现实时监测及环境预警监测奠定基础。
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