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癌症是目前影响人类健康的主要疾病之一。传统化疗药物是临床肿瘤治疗的主体,但是,单一化疗药物由于生物利用度低、易产生多药耐药,临床上多采用联合用药的方式。紫杉醇(Paclitaxel, PTX)是一类具有紫杉烷结构的抗肿瘤药物,它能够促进微管的形成并抑制微管的解聚,阻碍细胞的正常分裂,进而抑制肿瘤细胞的增殖。临床上常用来治疗乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌等。阿霉素(Doxorubicin, DOX)是一种蒽环类的抗肿瘤药,它能够嵌入到DNA分子的结构中,使碱基对之间的距离增大,进而引起DNA链的断裂和结构的破坏。临床上适用于淋巴癌、乳腺癌、肺癌、急性白血病等。紫杉醇联合阿霉素使用能够产生协同效应,提高治疗效果。而且,由于这两种化疗药物的作用机制不同,可在一定程度上预防多药耐药的产生,现已作为一线方案用于治疗晚期乳腺癌。但是,由于阿霉素和紫杉醇两种药物的性质有极大的不同,如何实现同时负载这两种不同的药物以及控制不同药物同步释放是研究者们目前面临的最大困难和挑战。本课题合成了具有pH敏感性的乌头酸酐-阿霉素(CAD)分子,然后以普郎尼克F127-壳聚糖(F127-CS)为载体,构建了F127-CS/CAD/PTX胶束,实现DOX与PTX的共递送。并对该载药胶束进行体外体内的相关评价,具体内容如下：1.CAD的合成、表征及F127-CS聚合物取代度的测定：根据文献设计合成了CAD,并对其结构进行验证。高效液相色谱图显示在保留时间6.15min和7.18min新出现了两个色谱峰,其分别为合成产物CAD-1和CAD-2的色谱峰；在CAD红外光谱图上,3532.16cm-1和3334.54cm-1波长处伯氨基上氢原子的伸缩振动消失,而在3416.36cm-1波长处出现较强的单峰吸收,同时,在1647.06cm-1处出现酰胺键的羰基吸收峰；核磁共振图谱显示在6.05ppm和6.24ppm处出现-COCH=基团上氢原子的特征位移。所有结果均显示成功合成了CAD分子。采用三硝基苯磺酸法建立了游离氨基测定的方法,测得F127-CS聚合物氨基的取代度为：每1moL壳聚糖中平均有0.832±0.119个氨基被取代。2.共载药胶束的制备及理化性质的考察：本课题采用薄膜分散法制备了F127-CS/CAD/PTX共载药胶束,并分别从载体材料与药物质量比、两种药物的质量比、超声时间以及超声温度四个方面对影响胶束载药量的因素进行考察,确定制备载药胶束的最佳工艺。同时通过细胞毒性实验筛选最佳药物配比,当阿霉素与紫杉醇的比例范围为0.6-1时,两种药物协同效果最佳。通过透射电镜观察到胶束呈圆整球形,无粘连。胶束的粒径为179.3nm,粒径分布均匀, Zeta电位为2.37mV。芘荧光探针法测定胶束的临界胶束浓度为0.039mg/mL。3.载药胶束的体外释放实验：采用透析袋法,以含0.5%的吐温-80的pH5.0和pH7.4的柠檬酸缓冲液为释放介质考察载药胶束在体外的释放行为。结果显示阿霉素和紫杉醇的释放均呈现依赖pH的性质,pH越低药物释放的就越快,而且阿霉素的释放速率要明显快于紫杉醇。4.载药胶束的体外细胞实验：以黑色素瘤B16细胞为模型,采用MTT法,考察F127-CS/CAD/PTX共载药胶束和PTX+DOX混合溶液对肿瘤细胞的毒性作用。随后采用荧光显微镜及流式细胞术考察肿瘤细胞对F127-CS/CAD胶束和DOX溶液的摄取情况。结果显示F127-CS/CAD/PTX胶束的1C50值小十DOX+PTX溶液,载药胶束对肿瘤细胞的毒性高于混合溶液。细胞摄取实验显示与DOX溶液相比,F127-CS/CAD胶束更容易被细胞摄取。5.载药胶束的体内药动力学实验：本实验以Wistar大鼠为实验动物,通过股静脉给药,于大鼠颈静脉窦取血,考察F127-CS/CAD/PTX共载药胶束和PTX+DOX混合溶液大鼠体内的药动力学特征。结果显示混合溶液组中PTX和DOX的AUC(o-∞)值分别为2.628 mg/L*h和0.512 mg/L*h,而胶束组中PTX和DOX的AUC(o-∞)值分别为5.450 mg/L*h和1.081 mg/L*h,明显高于混合溶液组。载药胶束组中PTX的体内半衰期(t1/2)为8.29h,比混合溶液中PTX的t1/2增加了4.5倍,载药胶束中的DOX的t1/2比混合溶液中的也有所增加。将PTX和DOX包载于胶束中能降低其在体内的清除率延长在体内的时间。6.载药胶束的体内药效学实验：本实验以B16细胞为模型建立荷瘤小鼠模型。通过尾静脉注射给药,以小鼠瘤体积变化及体重变化为指标,考察F127-CS/CAD/PTX共载药胶束和PTX+DOX混合溶液对肿瘤的抑制作用。实验结果显示载药胶束组和混合溶液组对小鼠肿瘤均具有较强的抑制作用,但是混合溶液组小鼠体重变化明显,第14日,混合溶液组小鼠体重是生理盐水组78.44%,毒性较大,而载药胶束组小鼠体重无明显变化,毒性较小。