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肝脏是机体生物转化的最主要器官,在代谢控制和解毒中发挥着核心作用,对肝保护免受伤害尤其重要。五味子具有良好的保肝作用,而五味子多糖(SCP)是五味子中的一种重要的生物活性物质。本研究通过对SCP进行提取和纯化,研究了SCP的体外抗氧化活性以及对CCl4致肝损伤的保护作用及其机制。主要研究内容和结果如下:本研究使用水提醇沉法得到五味子粗多糖,结合除蛋白获得纯化后的SCP-B。通过苯酚-硫酸法检测SCP-B的含量,其多糖含量大约为71.95%。并通过重现性试验、精密度试验、稳定性试验验证本试验的准确性。体外试验表明SCP-B对羟自由基(·OH)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(·DPPH)、超氧阴离子(·O2-)具有较强的清除能力,具有显著的体外抗氧化活性,并与多糖浓度呈正相关关系。本实验通过腹腔注射CCl4建立小鼠急性肝损伤模型,研究了不同剂量SCP-B对CCl4肝损伤的保护作用。50只小鼠随机分为5个组:空白组、CCl4组、LSCP-B组、MSCP-B组和HSCP-B组。空白组和CCl4组每天灌胃生理盐水,LSCP-B、MSCP-B、HSCP-B组分别灌胃100,200,400 mg/kg的SCP-B溶液,每天1次,持续7天。最后一次灌胃2h后,除空白组外,其余各组接受单次腹腔注射0.1μl/g的CCl4。在注射CCl4后16 h,采集血清和肝脏样品检测血清生化等指标。结果表明:(1)空白组肝脏细腻光滑,呈深红色;与空白组相比,CCl4组肝脏泛黄、体积肿大、弹性降低;随着多糖浓度的增加,肝脏病变程度会有所缓解;(2)CCl4组小鼠血清中ALT、AST含量极显著高于空白组,说明用CCl4建立动物急性肝损伤模型成功,SCP-B各组显著降低ALT和AST水平,说明SCP-B可以缓解肝损伤;(3)SCP-B各组能显著提高小鼠肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,并且三种指标增加的程度与多糖浓度呈正相关关系;降低丙二醛(MDA)水平,且随着多糖浓度的升高,MDA下降的越多,以上结果说明多糖可以通过抑制肝脏中脂质过氧化作用去缓解肝损伤;(4)SCP-B各组可以显著下调肝脏中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,且TNF-α和IL-6的降低程度与多糖浓度呈正相关关系;(5)小鼠肝脏组织病理学观察,根据HE染色结果,空白组小鼠肝脏中的细胞排列规则、形态正常,CCl4组肝细胞大量肿胀,且伴有炎性细胞浸润和细胞坏死,SCP-B组与CCl4组比较,肝细胞排列相对规则,水泡变性明显减少,细胞损伤程度降低,说明SCP-B可以改善小鼠的炎性细胞浸润和水泡变性,从而有效减少CCl4对肝细胞所造成的损害。本研究通过Western blot实验从小鼠肝脏内氧化和炎症调节机制这两个方面进行探究,Western blot结果表明,CCl4组小鼠肝脏中体蛋白3(NLRP3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase1)的表达水平以及核因子κB(NF-κB)和髓样因子(My D88)均显著升高。而SCP-B处理的三个组的小鼠肝脏NLRP3和Caspase1呈现出抑制的状态,NF-κB和My D88也呈现下降的趋势且与SCP-B的浓度呈负相关变化趋势;此外,CCl4组小鼠肝脏中核因子E2相关因子2(Nrf2)和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白(Keap1)的表达水平会显著降低,而SCP-B各组可以显著升高Nrf2和Keap1的水平,且升高的趋势与SCP-B的浓度呈正相关关系。以上Western blot结果说明,SCP-B可能通过抑制炎症反应和增强抗氧化机制缓解CCl4所致肝损伤的程度。上述结果表明,SCP-B对CCl4诱导所致小鼠急性肝损伤具有良好的防护效果,并且SCP-B的作用机制与其上调Keap1和Nrf2的表达增强肝脏的抗氧化作用和抑制NF-κB-p65、My D88、NLRP3和Caspase1的表达发挥抗炎作用有关。本研究为SCP-B应用于缓解肝损伤提供了理论依据,为中药干预肝损伤提供新的研究思路。