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目的:研究脂肪间充质干细胞在小肠黏膜下基质重建阴道过程中的作用,为组织工程学阴道重建探讨新的思路。方法:采用Ⅰ型胶原酶消化法分离提取SD大鼠脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs),流式细胞技术检测第3代ASCs细胞表面CD90、CD45、CD29、CD34、CD44、CD105抗原的表达情况,对第3代ASCs进行成骨、成脂诱导培养,茜素红及油红O染色鉴定诱导分化情况。将第3代ASCs按照2×105/cm2、4×105/cm2的细胞密度与SIS复合培养,于复合后24h、3d、5d及7d行MTT法检测细胞存活率。CM.dil标记第2代ASCs,荧光显微镜下观察。将标记后第3代ASCs按照细胞计数1.5×106个与2×2cm2的SIS支架复合培养,5天后移植。选取200-250g雌性SD大鼠,手术切除正常阴道后分别将单纯SIS支架或复合有CM.dil标记ASCs的SIS支架植入阴道残腔内,上端与宫颈口缝合固定,下端与切口周围皮肤吻合。术后7d、14d、28d切取“人工阴道”组织,复合支架组行冰冻切片,荧光显微镜下检测标记有CM.dil的ASCs残留情况,单纯支架组及复合支架组“人工阴道”均进行HE、Masson染色,对比两组“人工阴道”组织结构学特点,进而比较阴道重建效果。结果:采用酶消化法提取的ASCs形态为长梭形,融合度达80%后呈螺旋状排列。流式检测:第3代ASCs细胞表面抗原CD44、CD90、CD29、CD105、CD34及CD45的表达率分别为97.48%、99.91%、99.99%、100%、58.05%和0.79%。茜素红及油红O染色均为阳性。MTT法检测ASCs与SIS复合培养5d细胞存活率最高。荧光显微镜下观察CM.dil标记的ASCs细胞膜呈橙红色,细胞质及细胞核则表达为类圆形暗区,标记率可达100%。移植后的单纯SIS支架组及复合有ASCs的SIS支架组均可形成新生管状阴道,复合支架组冰冻切片免疫荧光检测可见CM.dil标记的ASCs存在于组织各层次内,以基底层为主,HE、Masson染色后两组均可见复层鳞状上皮细胞自阴道外口逆行向上生长,28d后均可覆盖阴道全长,其中复合支架组较单纯支架组阴道上皮细胞增长速率更快,形态结构更为规整,新生血管多,炎症细胞少,与单纯支架组相比阴道重建效果更好。结论:ASCs能促进阴道上皮增生、新生血管形成和抑制炎症反应,复合有ASCs的SIS支架移植阴道重建成功率更高。