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苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)通过结瘤固氮基因的时序表达,诱导宿主紫花苜蓿(Medicago sativa)形成根瘤,并将大气中惰性的分子氮转化成能被植物吸收利用的化合氮。这个过程中LysR家族转录因子起到至关重要的作用。前期的工作中,苜蓿中华根瘤菌Rm1021中90个候选LysR基因已经被定向插入突变,并筛选在自生生长时期、共生生长时期的表型,以期寻找更多在自生状态或共生固氮中有功能的LysR转录因子。 1)针对前期鉴定出的共生固氮必需的lsrA基因,我们应用了一系列扫描电子显微镜技术、生物化学、分子遗传学等方法,发现lsrA基因主要在根瘤侵染区开始表达,表达时序也在侵染阶段左右,但晚于bacA基因表达;LsrA蛋白缺失后根瘤固氮区中缺乏具有固氮能力的类菌体,nifA和fixK基因的转录水平降低,nifH基因的转录被完全阻断,因此LsrA蛋白为根瘤发育所必需,是新的根瘤发育信号传导途径成员。 2)通过表型筛选我们鉴定了苜蓿中华根瘤菌的oxyR基因,并研究了它的调节特性。oxyR突变后,苜蓿中华根瘤菌对过氧化氢敏感性提高,适应性降低。同时总过氧化氢酶/过氧化物酶活力降低。研究表明,在无氧化压力下,还原态OxyR作为katA和katB的抑制物行使功能,抑制katA和katB的转录;在氧化压力下OxyR由还原态转变为氧化态,使katA和katB去抑制,因此katA和katB表达水平提高。这些结果证明oxyR是苜蓿中华根瘤菌对环境中的过氧化氢做出反应的主要调节系统之一。 3)多序列分析发现,在苜蓿中华根瘤菌中,有6个LysR转录因子具有相似的氨基酸序列,同源性高并处于同一个进化分支上,与大肠杆菌LrhA同源,因此将这几个基因统称为LrhA亚家族。研究表明,这个亚家族基因与细菌运动、群体感应和蛋白分泌系统相关,功能很重要。 4)多序列分析还发现,在苜蓿中华根瘤菌中存在两个lysR类gcvA基因—gc vA1和gcvA2,充分激活gcvTHP操纵子并参与甘氨酸代谢需要它们的同时存在。其中,gcvA1对gcvTHP操纵子的激活需要甘氨酸诱导,而gcvA2对gcv THP操纵子的激活则不需要甘氨酸诱导。