黄曲霉毒素降解酶在酿酒酵母细胞表面上的展示及酶活性质的研究

来源 :曲阜师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:freeangel01
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黄曲霉毒素(Aflatoxin,AFT)为黄曲霉和寄生曲霉的次级代谢产物,是一类能够致癌,致畸,致突变的真菌毒素,被世界卫生组织列为一级致癌物,传统的物理、化学的去毒方法会造成营养成分大量损失,因此,近些年来,高效稳定的生物学方法备受科研者的关注。本研究从假蜜环菌(Armillariella tabescens)的总RNA出发,克隆编码得到黄曲霉毒素降解酶(Aflatoxin-detoxifizyme,ADTZ)基因,并把该基因连接到表面展示质粒载体pYD1上,成功构建了重组质粒pYD1-ADTZ,并将其转化到酿酒酵母菌EBY100中,通过PCR及双酶切筛选出阳性转化子,证明了ADTZ基因已经整合到酿酒酵母基因组中,经诱导表达后,用高相液相色谱法定性检测,结果表明:当诱导时间为96h,反应温度为28℃,反应时间为30min时,表面展示的黄曲霉毒素降解酶对黄曲霉毒素的去毒率为12.26%,再通过ELISA法定量检测黄曲霉毒素降解酶对黄曲霉毒素B1的降解情况,经过测定,相同条件下,表面展示的黄曲霉毒素降解酶对黄曲霉毒素的去毒率达到13.1%,酶活力达到0.93U/L。通过对表面展示的黄曲霉毒素降解酶的酶活性质的初步研究,分别诱导12h,24h,48h,96h,发现当诱导时间为48h时,黄曲霉毒素降解酶对AFB1的去毒率达到最大值,此时去毒率为24.2%,表面展示ADTZ与黄曲霉毒素B1的最佳反应时间为3h时,酶活性达最大,最大去毒率为27.3%。总结不同反应时间,不同诱导时间对去毒率及酶活性质的影响,为下一步工作——将黄曲霉毒素降解酶制备成饲料添加剂做准备。
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