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研究目的： 缺血性心脏病是危及人类健康的主要疾病。丹参素和川芎嗪分别来自于两大传统中药丹参和川芎，是公认的具有确切心血管活性的有效成分。临床使用上，二者具有协同作用。本实验室前期将两分子丹参素与一分子川芎嗪偶合，得到新化合物D2T。本课题旨在观察D2T在叔丁基过氧化氢诱导的氧化损伤模型上的心肌保护作用，并进一步探索其可能的作用机制。 研究方法： 本研究通过150μM叔丁基过氧化氢（t-BHP）刺激建立H9c2心肌细胞急性氧化应激损伤模型。首先，D2T或对照药丹参多酚酸盐（MLB）预保护2h，随后加入t-BHP，诱导特定时间后进行各项处理及如下相关指标检测：（1）MTT法检测细胞活力；（2）LDH释放率；（3）DCFH-DA、DHE、DHR123荧光探针分别检测细胞内总ROS、超氧阴离子(O2-)、过氧亚硝基(ONOO-)水平；（4）试剂盒检测细胞内脂质过氧化产物丙二醛（MDA）水平；（5）Hoechst33342/PI双染检测细胞凋亡与坏死比率；（6）JC-1法检测线粒体膜电位；线粒体肿胀度、细胞内ATP含量检测；（7）Western Blot法检测细胞线粒体凋亡通路相关蛋白（Bcl-2,Bax,Cyt c,Caspase-3和Cleaved-caspase-3）表达情况；PI3K/Akt及Nrf2/HO-1信号通路蛋白表达情况。此外，建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，测定大鼠心肌梗死面积，评价D2T对大鼠心肌梗死的保护作用。 研究结果： 1、D2T能够显著增强细胞活力，对抗t-BHP所诱导的H9c2心肌细胞氧化损伤，其保护作用具有浓度依赖性，并且D2T的作用明显优于相同浓度的对照药MLB及丹参素与川芎嗪混合物（2DSS+TMP）处理组。同时，D2T也能显著地降低细胞内LDH释放率。 2、D2T能够显著地降低t-BHP作用后细胞内活性自由基(包括ROS,O2-,ONOO-)的水平，以及脂质过氧化物MDA的含量。 3、D2T抑制线粒体膜电位下降，减轻线粒体肿胀程度，恢复细胞内ATP的含量。 4、Hoechst33342/PI双染结果显示，D2T能够显著地减少细胞的凋亡和坏死。Western Blot结果提示D2T能够提高抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，降低促凋亡蛋白Bax,Cyt c及Cleaved-caspase-3的表达。 5、D2T能够显著提高H9c2心肌细胞内p-PI3K、p-Akt蛋白的表达，该作用可被特异性PI3K抑制剂wortmannin完全阻断。D2T也能显著提高细胞内Nrf2和HO-1蛋白的表达水平。 6、D2T能够显著降低心肌缺血再灌注大鼠的心肌梗死面积。 研究结论： 新型丹参素衍生物D2T能够显著的保护t-BHP诱导的H9c2心肌细胞急性氧化损伤，减少细胞的凋亡和坏死、降低细胞内自由基的水平，减轻线粒体损伤。其保护作用可能通过激活PI3K/Akt和Nrf2/HO-1信号通路实现的。此外，D2T能显著降低心肌缺血再灌注大鼠的心肌梗死面积。因此，本研究为D2T成为抗心肌缺血/再灌注候选药物提供了初步理论依据。