榨菜高效再生体系的建立及其遗传转化影响因子的研究

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuechao002
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本文以榨菜(Brassica juncea Czern. et Coss. var. tumida)‘浙桐1号’、‘浙桐3号’、‘浙桐4号’和‘种都榨菜’4个品种为材料,研究了影响榨菜离体植株再生的一些重要因素,并建立了高效的植株再生体系。同时,对农杆菌介导的榨菜遗传转化影响因子也作了一些研究,并初步建立了榨菜遗传转化体系。 以‘浙桐1号’子叶、带柄子叶、子叶柄及下胚轴等外植体为材料,不同激素及其浓度对其分化影响的研究结果表明,在我们筛选的优化培养基中,‘浙桐1号’的4种外植体均能达到较高的分化频率。其中带柄子叶在MS+BAP 2 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+AgNO3 4 mg·L-1+蔗糖3%+琼脂0.8%的最佳培养基中分化频率最高,达到了100%;在优化培养基中分化频率最低的下胚轴也达到了60.7%。此外,研究结果还表明,不同类型外植体在添加BAP+2,4-D的培养基中,其再生能力相差很大;而在添加BAP+NAA的培养基中虽也存在差异,但各种外植体的分化频率都很高。在筛选培养基的同时,我们还观察到不同苗龄的外植体其再生频率呈显著性差异,但不同外植体的最佳接种苗龄不同,4 d的子叶分化能力最强,而其它外植体的最佳苗龄均为5~6 d。 通过培养基的各种成分对榨菜再生体系影响的研究,发现AgNO3能显著地促进外植体的分化,4~6 mg·L-1的浓度为最佳;而升高琼脂浓度,则表现为抑制外植体分化,但能减轻玻璃化现象。 在建立了高效再生体系的基础上,以下胚轴为外植体,预培养3~4 d,菌液浓度为OD600=0.5,侵染10~15 min,共培养4 d,壮观霉素浓度为5 mg·L-1时,抗性芽分化频率高达4.0%。不同类型外植体,其转化频率差异很大,以子叶和带柄子叶为外植体时,并未得到任何抗性芽;以子叶柄为外植体时,也只能得到一些抗性愈伤组织。 以质粒载体上的CaMV35S启动子两端序列设计特异引物,对在分化培养基上筛 摘要选20天后的抗性芽进行检测结果表明,外源基因已整合到榨菜基因组上。抗性芽阳性率达80%以上。
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