pH-温敏再生型两水相聚合物的制备及其应用于青霉素酰化酶化酶相转移催化反应

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两水相体系以其特有的性质在生物产品分离与生物反应中具有重要作用,但两水相成相聚合物的循环利用问题成为技术应用的最大障碍。本课题以N-异丙基丙烯酰胺(NIPA)、丙烯酸丁酯(BA)为单体,以偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,采用无规共聚法合成了新型温敏感聚合物PNB,合成得率为83.5%。并进一步利用红外吸收、核磁共振对该聚合物进行表征。该聚合反应,投料的单体摩尔比例为18.9:1,通过乌氏粘度计测定该聚合物的粘均分子量为2.2x103。该聚合物的低温临界溶解温度(LCST)为33℃,即当其水溶液大于此温度时,PSB可以沉淀的形式析出。该聚合物水溶液与另一自制并申请专利的pH敏感聚合物PADa分别以5%的浓度混合以后,可以形成界面明显的两水相体系。测定其回收率,聚合物PNB在单水相中的平均回收率为99.1%,在两水相重复循环使用聚合物进行回收实验六次,PNB的平均回收率保持在97.4%,PAI)B的平均回收率也保持在97.1%。   此两水相体系应用于青霉素酰化酶催化裂解青霉素生成6-氨基青霉烷酸(6-APA)。考察了10种常见的无机盐NaCl,KCl,KSCN,NaSCN,(NH4)2SO4,NaESO4,K2SO4,Na3PO4,K3PO4,Na2S2O3对6-APA、苯乙酸和青霉素分配系数的影响,发现整个体系在10mM KCI的存在下,底物和产物达到较好的分配,分配系数为3.54,1.76和3.87。在此体系中进行固定化青霉素酰化酶的催化反应,底物与产物富集在上相,固定化酶分配在下相,底物青霉素从上相扩散到下相经酶裂解生成产物6-APA和苯乙酸转移到上相,从而解除底物和产物抑制,提高酶催化效率。最终抗生素中间体6-APA的得率为95.4%。相对于通常水相反应有所提高。
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