研究背景恶性高血压肾硬化是肾脏疾病中的急危重症,也是引起和导致终末期肾脏病的重要原因之一,病情进展快,肾功能急剧恶化。临床常表现为血压急剧升高(舒张压≥130mmHg)、肾功能损伤、血尿、蛋白尿及其他靶器官损伤等。目前认为机械性应切力和肾素-血管紧张素系统(Renin-Angiotensin System,RAS)的活化是发病的关键因素,但其不能完全解释疾病的发生发展过程。近年来国内外研究结果发现恶性高血压肾硬化患者血浆中补体H因子、膜攻击复合物浓度的变化,补体活化产物沿肾脏小动脉壁和肾小球毛细血管袢沉积以及数个补体旁路途径成分及调节蛋白的突变基因。血管内皮细胞损伤是恶性高血压肾硬化发病的关键因素,且病理组织学表现和非典型溶血尿毒症(Atypical Hemolytic Uremic Syndrome,aHUS)基本一致,aHUS的关键发病机制是补体旁路途径的过度活化,提示补体旁路途径过度活化是否也参与恶性高血压肾硬化的发生?综上所述,我们推测补体旁路途径过度活化可能参与恶性高血压肾硬化的发生发展。本研究通过检测补体旁路途径活化因子水平、补体活化产物在肾组织沉积情况及其与临床指标相关性,进一步了解补体旁路途径过度活化在恶性高血压肾硬化中的作用,进而在临床治疗上为恶性高血压肾硬化患者提供新的治疗依据和治疗靶点。目的探讨补体旁路途径过度活化在恶性高血压肾硬化中的作用及其与临床指标的相关性。方法(1)选取我院2013年9月-2019年3月经肾穿刺活检病理确诊为恶性高血压肾硬化的50例患者作为病例组,同时选取于我院行零点肾穿刺的25例正常供肾者为正常对照,采用ELISA方法检测血浆和尿液中补体旁路途径活化B因子(Bb片段)、P因子、H因子及补体活化终末产物C3a、C5a水平,并与临床指标进行相关性分析。(2)利用肾活检石蜡标本,运用免疫组化法检测肾组织上补体活化终末产物C5b-9、经典途径活化产物C4d及凝集素途径活化产物MBL的沉积。双重免疫荧光标记法检测补体活化终末产物C5b-9与血管内皮细胞标志物CD34于肾脏小动脉内皮及肾小球毛细血管内皮细胞上的共定位情况。结果(1)恶性高血压肾硬化(病例组)患者血浆中补体旁路B因子、P因子及补体活化终末产物C3a、C5a水平较正常对照组明显升高(P<0.05),补体H因子水平较对照组明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。(2)恶性高血压肾硬化患者尿液中补体B因子、P因子和补体活化终末产物C3a、C5a水平与尿肌酐比值矫正比正常对照组明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);而补体H因子比正常对照组明显降低,差异也具有统计学意义(P<0.01)。(3)相关性分析:恶性高血压肾硬化患者血浆P因子水平与24小时尿蛋白量成显著正相关(rs=0.465,P=0.001)。病例组患者尿B因子/尿肌酐与血肌酐(rs=0.483,P<0.001)、尿 P 因子/尿肌酐与血肌酐(rs=0.352,P=0.012)、尿 C3a/尿肌酐与血肌酐(rs=0.319,P=0.024)均成显著正相关;尿H因子/尿肌酐与血肌酐(rs=-0.299,P=0.035)及 24 小时尿蛋白量(rs=-0.342,P=0.015)均成负相关;尿C5a/尿肌酐与血肌酐(rs=0.525,P<0.001)及24小时尿蛋白量(rs=0.496,P<0.001)均成显著正相关。(4)石蜡切片免疫组化染色、双重免疫荧光染色:免疫组化可见C5b-9沉积于肾脏小动脉壁和肾小球毛细血管壁,C4d沉积于肾小球及肾脏小动脉,未见凝集素途径活化产物MBL的沉积。正常肾组织中均未见C5b-9、C4d、MBL沉积。恶性高血压肾硬化肾组织中C5b-9沉积强度评分与血肌酐(rs=0.791,P<0.001)和24小时尿蛋白量(rs=0.345,P=0.014)显著正相关;双重免疫荧光标记可见绿色荧光标记的C5b-9与红色荧光标记的CD34共定位于肾脏小动脉内皮细胞及肾小球毛细血管内皮细胞上。(5)恶性高血压肾硬化患者血浆及尿液中补体旁路途径活化因子(B因子、P因子)与补体活化终末产物(C3a、C5a)及C5b-9沉积强度评分之间的相关性分析:血浆中补体旁路途径活化B因子与C3a成显著正相关(r=0.331,P=0.022),补体P因子与C5b-9评分成正相关(rs=0.300,P=0.034);尿液中补体旁路途径B因子与C3a、C5a及C5b-9评分均成显著正相关(rs=0.311,P=0.028;rs=0.465,P=0.001;rs=0.428,P=0.002),补体 P 因子与 C3a、C5a 均成正相关(rs=0.307,P=0.030;rs=0.442,P=0.001)。结论1.补体旁路途径过度活化参与恶性高血压肾硬化的发生,且可能在恶性高血压肾硬化的发病过程中起重要作用。2.恶性高血压肾硬化程度与补体旁路途径活化水平密切相关。