PcDNA3-hBMP2转染骨髓基质细胞及其稳定表达

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目的:通过观察转染了hBMP-2基因的骨髓基质细胞生物学性状变化和检测hBMP-2基因在受体细胞中表达水平,探讨骨髓基质细胞作为hBMP-2基因受体细胞的可行性。方法:应用脂质体介导的方法将携带hBMP-2基因的重组载体PcDNA3-hBMP2导入体外培养的骨髓基质细胞中,用G418筛选获得阳性细胞,分别应用PCR技术、原位杂交技术和酶联免疫吸附方法检测目的基因在受体细胞内DNA、mRNA和蛋白质的存在与表达状况。结果:在DNA水平,可检测到目的基因在阳性细胞中存在;在mRNA水平可检测到目的基因在阳性细胞中进行了转录;在蛋白质水平,从细胞的培养基中可检测到hBMP-2蛋白质。细胞的倍增时间和生长时间并没有因为目的基因的导入而改变,其倍增时间和生长时间与正常培养的细胞相比差异不显著。结论:骨髓基质细胞可以作为hBMP-2基因的受体细胞,基因表达可分泌hBMP-2蛋白质,认为可作为骨组织工程学中的种子细胞。
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