第一部分、大鼠肾脏缺血再灌注损伤时miRNA表达谱的筛查　　目的：通过基因芯片筛选大鼠肾脏缺血再灌注损伤后miRNAs表达谱的变化并分析。　　方法：　　1、构建SD大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型:大鼠经适应性饲养1周后，禁食约12h，腹腔麻醉并消毒后，经腹正中线切开皮肤、腹膜，充分暴露双侧肾蒂，使用无创微型血管夹迅速夹闭双侧肾蒂，伤口覆盖盐水纱布，恒温灯保持腹部体温，45min后同时松开血管夹，缝合腹膜和皮肤。大鼠造模12h后，再次麻醉大鼠，收集标本。　　2、实验分组:10周龄大鼠12只随机分为两组，每组6只:①实验组:双侧肾脏血管夹夹闭45分钟后再灌注12小时后收集标本;②假手术组:同样的方法游离暴露双侧肾蒂，直接覆盖盐水纱布后等待45min，12h后逐层缝合切口。　　3、标本收集和检测方法:心脏穿刺取血，检测血清肌酐与尿素氮，同时取肾脏利用microRNA芯片技术检测肾脏缺血再灌注时miRNA的表达变化，最后通过RT-PCR验证芯片检测结果。　　结果：　　1、成功构建大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型，缺血再灌注损伤后血清肌酐和尿素氮水平明显升高。　　2、通过microRNAs芯片结果观察到大鼠肾脏缺血再灌注损伤后36条miRNAs出现明显的表达变化，其中有15条miRNAs表达差异超过两倍。通过RT-PCR验证与miRNAs芯片结果一致，其中10条miRNAs表达上调，5条miRNA表达下调，表达上调的分别是:miR-98、miR-196a、miR-146b、miR-292-5p、miR-132、miR-327、miR-374、miR-290、miR-352、和miR-894，下调的miRNA是:miR-145、miR-29a、miR-329、miR-140和miR-375。　　结论　　大鼠肾脏缺血再灌注损伤时miRNA表达谱发生明显变化，可能通过炎症激活、细胞凋亡与增殖、血管形成和间质纤维化等参与肾脏缺血再灌注损伤的发生与发展，具体机制有待进一步研究证实。　　第二部分、缺氧复氧损伤时HUVEC中miR-98的表达变化及其通过靶基因Caspase-3对细胞凋亡的调控　　目的：体外探讨微血管内皮细胞在缺氧复氧损伤后miR-98表达水平的变化及其对细胞凋亡的影响，并探讨可能的机制。　　方法：　　1、培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVEC)，构建体外的缺氧复氧模型，通过轻质石蜡油覆盖细胞表面模拟缺血刺激。60min后，加入无血清无糖DMEM培养基培养24h。在不同时间点收集细胞，用RT-PCR法检测检测miR-98的表达。　　2、HUVEC转染miR-98 inhibitor和Mimics及相应的对照，抑制或过表达miRNA;在缺氧复氧模型，在mRNA水平和蛋白质水平检测潜在靶基因caspase-3的表达变化，流式细胞仪和TUNEL检测细胞凋亡情况。　　3、通过生物信息学检索，明确miR-98和caspase-3的3端UTR区的碱基互补序列。并构建3UTR(Casp3)报告基因载体和3UTR(Casp3) mut报告基因载体。目的基因3UTR区域构建至载体中报告基因萤光素酶的后面，通过比较过表达miRNA后，报告基因表达的改变定量反映miRNA对目的基因的抑制作用。　　结果：　　1、HUVEC缺氧复氧后miR-98表达4h即出现上升;24h时表达升至对照组5倍。　　2、体外转染miR-98 inhibitor后，发现Caspase-3与miR-98之间存在明显的负相关现象。　　3、成功构建3UTR(Casp3)报告基因载体和3UTR(Casp3) mut报告基因载体（突变模式为CTACCTCA突变为AACAUCGA; miR-98可调节CASP33UTR的 luciferase的表达(p＜0.0001)。　　结论：　　1、HUVEC缺氧复氧损伤后出现miR-98的表达上升。　　2、miR-98的表达对IRI损伤后HUVEC中capase-3和细胞凋亡有负向调节作用。说明miR-98可对缺氧复氧损伤后的微血管内皮细胞产生一定的保护作用。　　3、Caspase-3为miR-98的靶基因。