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RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种序列特异的双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应序列基因的表达或使其沉默的过程,已在多种不同的生物体中被发现。它通过内、外源双链RNA触发同源性mRNA的降解,从而使该基因表达沉默(gene silence)。目前认为这一途径的主要媒介为小的干扰RNA(Small interference RNAs,siRNAs),即21-23 nucleotide(nt)的双链RNA,这些siRNAs由一种Dicer酶剪切长的dsRNA而形成。实验结果表明,RNA干扰过程是一个多种因素参与的过程。2001年Elbashir等人首次用外源21nt-23nt的siRNAs成功地在哺乳动物细胞中诱导了RNAi。小干扰RNA可以在哺乳动物细胞中引发RNA干扰途径为在哺乳动物细胞中利用RNA干扰开辟了一条新的思路。 目前,siRNAs的实现途径有如下几种:(1)直接化学合成;(2)体外转录;(3)由RNaseⅢ家族的酶消化长片段的双链RNA得到;(4)由含有U6或H1启动子的表达载体在细胞内表达而得到;(5)由PCR来源的siRNA表达盒在细胞内表达。然而这些形式的siRNAs进入细胞都必须依赖转染试剂,很难在细胞内对某种基因形成稳定的长期的抑制效果。必须寻找更有效的进入细胞的运载系统。 逆转录病毒载体具有高效转导(transduction)、稳定整合和无免疫原性等优点而被广泛地应用。多数实验都采用以小鼠莫洛尼氏白血病病毒(Moloney murine leukemia virus,Mo-MuLV)为骨架的RV载体。采用GP-293细胞系作为逆转录病毒包装细胞系,该细胞系可以稳定表达逆转录病毒的gag和pol蛋白。利用疱疹口炎病毒G(VSV-G)提供包膜蛋白,VSV-G可识别一种在所有细胞上都存在的磷脂,所以理论上能有效感染所有有丝分裂的细胞。 小鼠α-和β-珠蛋白基因簇分别位于第11和7号染色体上。小鼠α-珠蛋白基因簇包括三个结构基因(ζ,α1,α2),小鼠β-珠蛋白基因簇包括四个结构基因(εy,βH1,β-major(β-maj),and β-minor(β-min))。其表达不仅具有红系组织特异性和不同发育阶段(胚胎期和成年期)特异性,而且两类基因的终产物间始终维持平衡。