论文部分内容阅读
双微体是游离于染色体外的小片段球状染色小体,具有独特的自我复制功能,见于乳腺癌、肺癌、卵巢癌、结肠癌,尤其是神经母细胞瘤等多种人类肿瘤细胞,是基因扩增的一种表现形式,常携带耐药基因或原癌基因,导致肿瘤相关蛋白的过表达,针对携带基因的靶向治疗对肿瘤的预后和治疗具有重要的意义。尽管有关双微体的研究很多,但专门针对各种肿瘤的双微体染色体来源的研究很少,我们从ATCC公司筛选所有携带双微体的肿瘤细胞系,进行细胞培养,并在第3代、8代、13代时获取细胞。利用染色体核型分析技术检测双微体的数目及分布情况及粗略的细胞遗传学特征,发现不同肿瘤细胞系所携带双微体的数目及分布相差极大。继而通过arrayCGH获得扩增的基因,并明确其断裂点,采用相应的DNA探针,利用荧光原位杂交确认基因扩增并进一步确认染色体的来源及明确扩增的形式。我们发现在10个细胞系中,血液肿瘤占10%(HL-60细胞系),MC-IXC细胞系,COLO-320DM细胞系,SW480细胞系及HL-60细胞系中由于MYC扩增基因所致,双微体广泛存在,但其扩增区域的断裂点不同,其中前2个细胞系MYC双微体与MYC均质染色区共存,后2个细胞系仅存在MYC双微体。SW1783细胞系、5637细胞系、CAMA-1细胞系的扩增区域分别包含PDGFRA基因、RAF1基因及SOX4基因、MYEOV基因及CCND1基因,均以均质染色区的形式存在。T84细胞系、SNU-1细胞系及NCI-N87细胞系仅在部分细胞中见少量双微体,arrayCGH未见明显扩增的区域,未行扩增基因FISH检测。得出主要以下结论:1.同一细胞内的双微体及均质染色区可携带不同来源的基因,病理类型相同的肿瘤细胞可携带不同来源的双微体。2.携带相同原癌基因的不同肿瘤,双微体的断裂点不同;3.双微体拥有除均质染色区以外的形成机制;4.不同代细胞间的基因扩增未见明显改变;5.来源于不同染色体的基因可以共同交替扩增,形成一个新的混合的扩增区域。并验证了以下结论1.双微体多见于实体肿瘤细胞系中,血液肿瘤中罕见;2.携带双微体的细胞多伴有复杂的染色体核型改变;3.不同的肿瘤细胞系携带来源不同的双微体,数目相差巨大;4.在某些肿瘤细胞系中,双微体与均质染色区可以相互转化。主要创新点:(1)首次筛选不同的包含双微体的实体肿瘤细胞系及血液肿瘤细胞系共同比较研究。(2)联合应用染色体核型分析、arrayCGH及FISH技术,准确有效的找出扩增基因及扩增形式。(3)利用arrayCGH技术明确扩增区域的断裂点。