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研究背景肺结核性胸水和肺腺癌性胸水是临床最常见的两种胸水。这两种胸水的鉴别目前临床多采用多指标检测综合分析方法,但各种指标的敏感性及特异性都不尽相同。有近20%的结核性和癌性胸水,在临床经全面检查仍难以鉴别。如何鉴别这两种胸水,是目前临床上的一大难点。SDS-PAGE可在电场作用下,将全部蛋白质依据蛋白质亚基的分子量大小进行分离。目前SDS-PAGE技术已用于临床尿液、血液等的分离,通过对比电泳条带的不同用于相关疾病的鉴别。目前尚未见此方法用于分离胸水蛋白质的报道,也未见用于肺结核性胸水与腺癌性胸水的诊鉴。胸水中包含了血浆蛋白和来自肺组织的蛋白,肺结核性胸水与肺腺癌性胸水中也包含有各自疾病的特有蛋白。两种胸水的蛋白质差异,既往的研究主要涉及某些具体蛋白成分在肺癌性或结核性胸水中的变化规律,未见两种胸水中总体蛋白质的比较研究。蛋白质组学的发展为体液的研究提供了很好的技术平台,涉及血浆、血清、脑脊液、尿液、唾液等体液的蛋白质组学研究正蓬勃发展。目前对于体液蛋白质组学的研究方兴未艾,血浆或血清蛋白质组学研究较多,胸水蛋白质组学国内外报道很少。而胸水成分虽然与血浆相似,但是由于局限于胸腔的病变有其自身的特点,所以与血浆成分还有较多的差别。胸水蛋白质组学的研究可深化对胸腔内疾病的认识。拉曼光谱是光子与分子之间非弹性散射所产生的散射光谱。拉曼光谱分析方法具有非破坏性优点,是很重要的分子结构分析手段。表面增强拉曼散射（SERS）技术可研究界面与表面吸附分子例如生物大分子脱氧核糖核酸和蛋白质等的排列取向及结构,可以直接用于分析水相生物分子的结构状态且所需样品用量很少。拉曼光谱学技术已广泛应用于化学、材料、环境、考古以及生物医学等领域,并在多个领域得到了迅速的发展。在肿瘤研究领域,拉曼光谱已应用于病理组织切片、细胞、血液样本等的研究,运用拉曼光谱方法检测胸水样本尚未见有报道。研究目的从蛋白质水平揭示肺结核性胸水与肺腺癌性胸水的差异,为两者胸水的鉴别诊断研究奠定基础。研究方法1.收集南方医院2007年7月至2008年10月的160例胸水,其中肺结核性胸水45例,肺腺癌性胸水47例。每例均经组织病理学、细胞病理学或结合临床资料证实。BCA法测定每例胸水的蛋白浓度,并比较肿结核性与腺癌性胸水的蛋白浓度。2.采用SDS-PAGE电泳技术分离肺结核性与腺癌性胸水中的蛋白质:选用28例肺结核性胸水及36例肺腺癌性胸水,每例均以5%浓缩胶和不同浓度（6%、8%、10%、12%、15%）之分离胶行SDS-PAGE分离胸水中蛋白质,考马斯亮蓝染色,AlphaEaseFC Stand Alone图像分析软件分析10%分离胶凝胶图像。3.肺结核性与腺癌性胸水的差异蛋白质组学研究:45例肺结核性及47例肺腺癌性胸水分别等体积混合后,离心去除细胞成分、去除高丰度白蛋白和IgG、丙酮沉淀除盐、Bradford法测定蛋白浓度。两种胸水分别取等质量进行双向电泳。ImageMaster 2D Platinum图像分析软件分析凝胶图像、找出差异蛋白质点,进而质谱鉴定这些差异蛋白质。4.肺结核性与腺癌性胸水SERS图谱比较:取13例肺结核性胸水及16例腺癌性胸水,用SERS方法比较两者SERS图谱拉曼峰的不同,并对差异峰进行诊断试验评价。研究结果1.BCA法测定肺结核性胸水和肺腺癌性胸水的蛋白浓度分别为（68.77±14.41）mg/mL和（54.92±10.24）mg/mL,肺结核性胸水的蛋白浓度高于肺腺癌性胸水,差异具有统计学意义（P＜0.05）。2.SDS-PAGE图谱分析表明,肺结核性胸水50KD-60KD分子量范围内的蛋白含量高于肺腺癌性胸水,差异具有统计学意义（P＜0.05）。3.两类胸水经双向电泳分离、筛选,质谱鉴定出6种差异蛋白质,其中肺腺癌性胸水Apolipoprotein D、Ficolin-3、Serotransferrin、Complement C4-B的含量高于肺结核性胸水,plasma retinol-binding protein、Alpha-1-antitrypsin的含量低于肺结核性胸水。4.肺结核性胸水和肺腺癌性胸水的拉曼光谱图谱基本一致,肺结核性胸水的拉曼强度高于肺腺癌性胸水;以拉曼峰(1282.74 cm-1)的出现作为诊断肺腺癌性胸水的诊断指标,其诊断的灵敏度为68.75%,特异度为84.61%,标准化阳性预测值为70.25%,标准化阴性预测值为79.52%,标准化误诊率为25.98%,标准化准确度为74.02%,可用于肺结核性胸水与肺腺癌性胸水两者的辅助鉴别诊断。结论肺结核性胸水与肺腺癌性胸水蛋白质组学方面具有明显差异,表现在:1.肺结核性胸水的蛋白浓度高于肺腺癌性胸水,差异具有统计学意义（P＜0.05）;2.肺结核性胸水50KD-60KD分子量范围内的蛋白含量高于肺腺癌性胸水,差异具有统计学意义（P＜0.05）;3.肺腺癌性胸水Apolipoprotein D、Ficolin-3、Serotransferrin、ComplementC4-B的含量高于肺结核性胸水,plasma retinol-binding protein、Alpha-1-antitrypsin的含量低于肺结核性胸水;4.拉曼光谱分析可用于肺结核性胸水与肺腺癌性胸水的辅助鉴别诊断,肺结核性胸水的拉曼强度高于肺腺癌性胸水,胸水拉曼峰(1282.74 cm-1)的出现可作为肺腺癌性胸水的辅助诊断指标,诊断的灵敏度为68.75%,特异度为84.61%。