背景：胃癌是常见的消化道恶性肿瘤,以手术和化疗为主的综合治疗是胃癌的标准治疗方式。其中,新辅助化疗是进展期胃癌综合治疗的重要组成部分。但是目前在进展期胃癌的诊断和治疗过程中,仍缺乏对肿瘤情况及新辅助化疗的疗效进行实时准确评价的有效评估手段。多数患者在治疗过程中出现化疗耐药,甚至在术前新辅助化疗期间即出现原发耐药,从而导致肿瘤进展,这是进展期胃癌预后不良的主要原因。因此,探索敏感性和特异性更高的胃癌诊疗相关标志物,对于准确判断肿瘤进展、实时评价疗效有重要意义,也是进一步探索胃癌发生发展机制,寻找有效治疗靶点的重要手段。MicroRNA (miRN A)是一类内源性非编码小分子单链RNA,通过与靶基因mRNA的3’UTR碱基互补结合,促进靶基因mRNA的降解或抑制其翻译,导致靶基因表达下调,从而影响细胞的增殖、分化和凋亡等过程。miRNA参与肿瘤细胞的活动及相邻微环境的变化,在多种肿瘤中异常表达,与肿瘤的发生发展密切相关。外周循环血中也存在miRNA,其含量可在一定程度上反映肿瘤大小、浸润深度等情况；同时,肿瘤组织中往往存在特异性miRNA表达量的上调或下调。因此,miRNA可以作为肿瘤诊断和治疗的靶标。MiR-301a在结直肠癌、胰腺癌等肿瘤中呈现异常高表达,与多种恶性生物学行为及预后密切相关。研究表明,miR-301a在胃癌组织中的表达较配对的癌旁组织明显升高,与胃癌的分化程度、增殖、侵袭、转移密切相关,在胃癌的发生、发展过程中具有重要作用。但是miR-301a在胃癌发生发展中的作用及机制尚不明确,其与胃癌新辅助化疗的相关性也不明确。深入研究其作用机制,对于探索胃癌新辅助化疗的疗效评价相关标志物具有重要意义。在胃癌的发生发展过程中有许多因素参与,其中microRNA也发挥了重要作用。miR-32在许多恶性肿瘤中表现为“癌基因”的作用,但在胃癌中的作用尚不清楚。我们发现miR-32在胃癌患者的外周血和胃癌组织中呈异常高表达,可能促进了胃癌的发生发展,miR-32通过调控其靶基因Kruppel样因子-4(KLF-4)促进胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移。探索miR-32在胃癌发生发展中的作用机制,为胃癌的临床诊治提供新的理论依据和潜在靶点。胃印戒细胞癌是胃癌的一种特殊病理类型,具有独特的临床病理特征。例如,早期诊断率低、对化疗不敏感、易于向胃壁发生浸润性生长等。目前对于胃印戒细胞癌尚无针对性的个体化治疗方案,患者预后极差。利用microRNA芯片发现miR-935在胃印戒细胞癌中较非印戒细胞癌表达明显降低,miR-935可能通过调控靶基因Notch1在胃印戒细胞癌中发挥作用。研究miR-935在胃印戒细胞癌中的作用机制,利于我们更好地了解这种特殊类型的胃癌,为提高此类患者的诊疗效果提供新的思路。目的：(1)研究新辅助化疗及营养支持治疗对进展期胃癌患者肿瘤缓解及预后的意义;(2)研究miR-301a对进展期胃癌新辅助化疗疗效评价的意义,明确miR-301a及其靶基因在胃癌新辅助化疗中的作用机制；(3)研究miR-32及其靶基因在胃癌发生发展中的作用机制；(4)研究miR-935及其靶基因在胃印戒细胞癌中的作用机制。方法：(1)收集在我院接受新辅助化疗及手术治疗的147例进展期胃癌患者的临床病理资料,分析患者在接受新辅助化疗及营养支持治疗后的肿瘤缓解情况及预后。(2)通过实时定量PCR法检测miR-301a在新辅助化疗患者胃癌组织及外周血中的表达水平,并对新辅助化疗前后CA199、CEA、CA724的表达变化、肿瘤的缓解情况进行对比；在胃癌细胞AGS和MGC8-03中发现miR-301a抑制顺铂、5-氟尿嘧啶诱导的细胞凋亡；预测并确认谷氨酰胺合成酶(GLUL)为miR-301a的靶基因为；采用qPCR检测胃癌组织和配对癌旁中GLUL的表达,并分析其与miR-301a的相关性。(3)采用实时定量PCR检测miR-32在胃癌组织及其配对的癌旁组织中的表达情况；在胃癌细胞系HGC-27和AGS中瞬时转染miR-32 mimic, MGC8-03MKN-45中瞬时转染miR-32 inhibitor,通过xCELLigence RTCA MP系统检测miR-32对胃癌细胞增殖能力的影响,通过transwe11实验检测miR-32对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响;通过Targetscan7.0软件预测、双荧光酶报告基因确认miR-32与KLF4的3’UTR结合;观察KLF4基因对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的作用；采用qPCR检测胃癌组织和配对癌旁中KLF4的表达情况,并分析其与miR-32的相关性。(4)在非印戒细胞癌(MGC8-03, SGC-7901, AGS)和印戒细胞癌(MKN-45和KATO-Ⅲ)中进行Affymetrix miRNA芯片分析,筛选出功能尚未被报道的miR-935；在健康人胃组织、永生化的正常胃粘膜上皮细胞株GES-1及9株胃癌细胞系中检测miR-935的表达情况；在MKN-45和KATO-Ⅲ中瞬时转染miR-935 mimic, MGC8-03和HGC-27中瞬时转染miR-935 inhibitor:通过xCELLigence RTCA MP系统检测miR-935对胃癌细胞增殖能力的影响；通过transwell实验检测miR-935对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响；通过Targetscan7.0软件预测、双荧光酶报告基因验证Notch 1是miR-935的靶基因；采用qPCR检测胃癌组织和配对癌旁中Notch 1的表达情况,并分析其与miR-935的相关性。结果：(1)147例进展期胃癌患者中,男性占66%(97/147),女性占34%(50/147)。治疗前病变部位位于胃上部者占23%(34/147),胃体中部者占31%(46/147),胃窦部者占46%(67/147)。R0切除者135例,占91.8%。患者平均接受3.7周期的新辅助化疗。术中清扫淋巴结15-77枚,平均28枚,淋巴结阳性者占68.7%(101/147)。147例患者新辅助化疗后评价为CR(完全缓解)者2例,PR(部分缓解)者74例,SD(稳定)者55例,PD(进展)者16例,化疗有效率(CR+PR)为51.7%(76/147),疾病控制率为89.1%(131/147)。45.5%(67/147)的患者N分期发生降期：55.6%(5/9)的T2期患者T分期发生降期；42.6%(29/68)的T3期患者T分期发生降期；58.6%(41/70)的T4期患者T分期发生降期。新辅助化疗后的病理TNM分期与预后显著相关(P＜0.01)。(2)miR-301a在胃癌组织及外周血中的表达较正常人明显升高。相比于CA199、CEA、 CA724, miR-301a在新辅助化疗前后的表达水平变化更加符合肿瘤缓解情况。在胃癌细胞中过表达miR-301a可降低细胞的化疗敏感性。谷氨酰胺合成酶(GLUL)是miR-301a的靶基因。在胃癌组织中miR-301a与GLUL的表达呈负相关。(3)miR-32在胃癌组织、胃癌患者血浆以及胃癌细胞中呈高表达。过表达miR-32可促进胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移。KLF4是miR-32的靶基因。在胃癌组织中,miR-32与KLF4的mRNA水平呈负相关。(4)与非印戒细胞癌及正常胃癌组织相比,miR-935在胃印戒细胞癌细胞系、胃印戒细胞癌组织中呈低表达。miR-935可抑制胃印戒细胞癌细胞的增殖、侵袭和迁移。Notch 1是miR-935的靶基因,miR-935通过Notch 1在胃癌中发挥类似抑癌基因的作用。在胃癌组织中,miR-935与Notch 1的mRNA水平呈负相关。结论：(1)新辅助化疗对进展期胃癌患者具有良好的化疗有效率和疾病控制率,肿瘤分期与新辅助化疗患者的预后具有相关性,新辅助化疗后TNM分期较早的患者预后较好。营养支持治疗可改善患者的营养状况,维持体重,降低化疗不良反应发生率。(2) miR-301a比传统肿瘤标志物更有效地评价胃癌新辅助化疗的疗效,可作为胃癌诊断和化疗疗效评价的标志物；miR-30la可通过调控靶基因GLUL降低胃癌细胞对化疗药物的敏感性。(3)miR-32在胃癌患者的血浆、组织及胃癌细胞系中高表达；miR-32可通过靶基因KLF4促进胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移,发挥癌基因的作用。(4)miR-935在胃印戒细胞癌细胞系、胃印戒细胞癌组织中呈低表达。miR-935可通过靶基因Notch 1抑制胃印戒细胞癌细胞的增殖、侵袭和迁移,在胃癌中发挥类似抑癌基因的作用。