COL11A1促进裸鼠结肠癌成瘤、转移及相关机制的初步研究

来源 :贵州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fongyu061440
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目的:探索XI型胶原蛋白α1链(COL11A1)在裸鼠结肠癌成瘤、转移中的作用,并探讨TGF-β1/Smad2通路对COL11A1的表达调控。方法:通过蛋白质免疫印记(Western Blot)、实时荧光定量PCR(RT-PCR)、细胞体外实验即细胞迁移、侵袭、以及增殖实验,从结肠癌细胞HCT116、SW480中筛选出侵袭力较强和COL11A1含量表达量较高的细胞株HCT116;慢病毒转染HCT116细胞,构建沉默/过表达COL11A1的稳转株,按照分组NC组(生理盐水组)、空载组、ov-COL11A1(过表达COL11A1组)、sh-COL11A1组(沉默COL11A1组),HCT116组取第三代/第四代稳转株分别构建结肠癌皮下移植瘤以及尾静脉肺转移模型,每个小组12只4-6周Balb/cu裸鼠,皮下一直流分别于右前腋窝皮下、尾静脉注射0.1ml 2x106 HCT116细胞悬液,分别在30天、45麻醉后处死动物,通过RT-PCR、Western Blot以及HE染色分析COL11A1在裸鼠结肠癌成瘤、转移中的作用;HCT116组作为对照,分别将TGF-β1刺激剂、TGF-βR1受体抑制剂LY2157299作用于结肠癌细胞HCT116,蛋白印迹法检测作用前后p-Smad2、COL11A1的表达变化以及EMT相关蛋白E-cadherin和FAP-a的变化,体外Transwell迁移实验和侵袭实验检测作用前后HCT116细胞的侵袭、迁移能力变化。结果:1.蛋白印迹法、荧光定量PCR以及体外细胞实验发现,与SW480相比,HCT116中COL11A1的表达量更高,且其增殖、迁移以及侵袭能力更强。2、慢病毒转染,成功构建沉默/过表达COL11A1的稳转株HCT116,ov-COL11A1可显著促进结肠癌细胞HCT116裸鼠皮下成瘤以及肺转移,相反,sh-COL11A1可抑制其皮下成瘤以及肺转移,间接反映出COL11A1可促进结肠癌细胞HCT116增殖、肺转移。3、加入TGF-β1刺激HCT116细胞后,COL11A1表达上调,且促进其磷酸化过程,并影响EMT相关蛋白-上皮标志物E-cadherin下调,间质标志物FAP-a上调,相反,加入TGF-βR1受体抑制剂LY2157299,TGF-βR1和COL11A1表达下调,且其磷酸化过程受阻,EMT相关蛋白-上皮标志物E-cadherin上调,间质标志物FAP-a下调。结论:1、COL11A1促进裸鼠结肠癌体内成瘤、转移能力2、COL11A1可能通过参与TGF-β1/Smad2信号通路的激活诱导EMT进程,从而影响结肠癌细胞的生长、浸润和转移能力
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