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目的: 肾癌又称为肾腺癌或肾细胞癌(Renal cell carcinoma,RCC),起源于肾实质泌尿小管上皮系统,是泌尿系统最常见的恶性肿瘤.肾癌的临床症状不典型,约30%的患者在诊断时已经发展成转移性肾癌.肾癌的治疗较困难,尽管外科手术联合免疫治疗作为一种新兴的治疗手段,但它仍没有达到满意的治疗效果.因此,深入研究RCC增殖和转移的分子机制,探索新的转移性肾癌治疗靶点是RCC研究的至关重要任务.Ras-GTP酶激活蛋白Src同源结构域3结合蛋白1(Ras-GTPase-activating protein SH3domain binding protein,G3BP1)在多种肿瘤中过表达,包括乳腺癌、胃癌、结肠癌和肝癌等,但其在肾癌中的作用尚未见报道.本研究将检测G3BP1在RCC中的表达情况,及其表达与肾癌临床病理参数间的相关性,探讨G3BP1在体外和体内对RCC细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,初步明确G3BP1在调控肾癌增殖和转移中的相关分子机制. 方法: 1.应用Western blot和免疫组化的方法检测G3BP1在肾癌组织和其相对应的癌旁组织中的表达情况;统计学分析G3BP1表达与肾癌临床病理参数之间的相关性. 2.应用慢病毒介导的RNA干扰技术构建G3BP1稳定降表达的肾癌ACHN和A498细胞系,Western blot和实时荧光定量PCR方法检测其蛋白质和mRNA的表达水平. 3.应用CCK8实验检测G3BP1降表达对肾癌细胞ACHN和A498增殖能力的影响. 4.应用Western blot检测G3BP1降表达对细胞增殖相关蛋白c-myc、cyclin D1表达的影响. 5.应用迁移实验、Matrigel侵袭实验和EGF诱导的趋化运动实验检测G3BP1降表达对肾癌细胞ACHN和A498迁移能力、侵袭能力和EGF诱导的趋化运动能力的影响. 6.应用Western blot和免疫荧光实验检测G3BP1降表达对上皮间质转化相关蛋白表达的影响. 7.应用双荧光素酶报告基因实验筛选G3BP1降表达影响肾癌增殖和转移的相关信号通路分子. 8.应用Western blot检测G3BP1在调控肾癌增殖和转移过程中的分子机制. 9.应用Western blot检测G3BP1、p-STAT3及IL-6在临床肾癌组织和相对应的癌旁组织中的表达,统计学分析G3BP1的表达与p-STAT3及IL-6表达的相关性. 10.应用小鼠活体成像技术研究G3BP1降表达对肾癌ACHN细胞原位异种移植瘤增殖和肝肺转移的影响. 结果: 1.Western blot和免疫组化检测发现,与相对应的癌旁组织相比,G3BP1在肾癌组织中表达增高,且G3BP1表达与TNM分期和Fuhrman分级相关(*P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤部位和肿瘤坏死等因素无关. 2.应用慢病毒介导的RNA干扰技术成功建立G3BP1稳定降表达的肾癌细胞ACHN和A498系,Western blot和实时荧光定量PCR检测G3BP1的蛋白质和mRNA表达水平(**P<0.01)均明显下降. 3.G3BP1降表达的肾癌细胞ACHN和A498与对照组相比增殖能力均显著降低(**P<0.01). 4.G3BP1降表达的肾癌细胞ACHN和A498与对照组相比,细胞增殖相关蛋白c-myc和cyclin D1表达水平均明显下降. 5.G3BP1降表达的肾癌细胞ACHN和A498与对照组相比,迁移能力、Matrigel侵袭能力和EGF诱导的趋化运动能力均显著降低(**P<0.01). 6.G3BP1降表达的肾癌细胞ACHN和A498与对照组相比,上皮间质转化相关蛋白的上皮细胞标志E-cadherin表达水平明显升高,而间质细胞标志N-cadherin、Vimentin、Snail和Snail表达水平明显减低. 7.G3BP1降表达的肾癌细胞ACHN和A498与对照组相比,p-STAT3信号通路的活性受到明显抑制(**P<0.01). 8.G3BP1降表达的肾癌细胞ACHN和A498与对照组相比,p-STAT3蛋白表达水平明显降低;G3BP1降表达显著抑制IL-6对下游信号分子STAT3的活化,从而抑制肾癌细胞的迁移和侵袭能力(**P<0.01);STAT3的特异性抑制剂stattic不影响G3BP1的表达. 9.与相对应的癌旁组织相比,肾癌组织中G3BP1、IL-6和p-STAT3的表达均升高(*P<0.05),且G3BP1的表达与IL-6和p-STAT3的表达显著相关(**P<0.01). 10.G3BP1降表达组与对照组相比,肾脏原位肿瘤部位和肝肺转移灶部位的荧光强度降低,且肾脏原位肿瘤体积较小,形成的肝肺转移灶数目也明显比对照组少(**P<0.01). 结论: 1.G3BP1在肾癌组织中高表达,且能够促进肾癌增殖和转移. 2.G3BP1降表达后,通过抑制c-myc和cyclin D1等细胞增殖相关蛋白的表达来抑制肾癌细胞增殖. 3.G3BP1降表达后,通过抑制EMT来抑制肾癌细胞转移. 4.G3BP1降表达后,p-STAT3信号通路的活性受到明显抑制;G3BP1降表达能够显著抑制IL-6对下游信号分子STAT3的活化,从而抑制肾癌细胞的迁移和侵袭能力. 5.与相对应的癌旁组织相比,肾癌组织中G3BP1、IL-6和p-STAT3的表达均升高,且G3BP1的表达与IL-6和p-STAT3的表达显著相关.