有机磷农药是目前我国使用最多的农药,其中敌敌畏（dichlorvos,DDVP）和亚胺硫磷（phosmet,PMP）都是有机磷农药中最常用的品种。由于DDVP和PMP使用广泛,要保证所有食品完全不含其残留是不可能的。世界上几乎所有国家都制定了食品和饲料中DDVP和PMP的最大允许含量并作为强制性限量标准。目前,检测DDVP和PMP的方法主要有气相色谱法和酶抑制法,但是前者的样品前处理过程复杂并需要昂贵的仪器设备,而后者的假阳性较高。为此,免疫学方法因其具有快速、准确、灵敏、操作简单、成本低等优点而成为检测DDVP和PMP等有机磷农药的研究热点。本课题从抗原的构建着手,首先采用Mannich法将DDVP、PMP与阳离子化牛血清白蛋白（cationized bovine serum albumin,cBSA）偶联,构建了完全抗原DDVP-cBSA和PMP-cBSA,然后利用紫外和红外光谱分析方法对它们进行了分析。在此基础上,分别以DDVP-cBSA和PMP-cBSA免疫BALB/c小鼠,分析了两种抗体的产生进程、效价和灵敏度。同时以DDVP-cBSA为免疫抗原,采用细胞杂交瘤技术,获得了能稳定分泌抗DDVP单克隆抗体的杂交瘤细胞,并对单克隆抗体的效价和灵敏度进行了分析。1.完全抗原的构建及其光谱学分析DDVP和PMP的分子量分别为190和317,是只有反应原性而无免疫原性的半抗原（hapten）,只有通过与载体蛋白偶联,才能刺激机体产生抗体。本研究首先制备了cBSA,然后采用Mannich法,使其与DDVP和PMP偶联,得到摩尔比分别为40:1和1.5:1的DDVP-cBSA与PMP-cBSA。再利用UV-Vis和FT-IR光谱分析方法,对cBSA、DDVP-cBSA和PMP-cBSA进行分析。结果表明,cBSA的UV-Vis最大吸收峰有微弱蓝移,而DDVP-cBSA在278 nm处有蛋白质的吸收峰,其杂质峰掩盖了DDVP的特征吸收峰;PMP-cBSA在278 nm处的吸收峰,迭加了PMP的特征吸收峰。在FT-IR中,DDVP与cBSA偶联后,在1286～1258 cm^-1处和1050～950 cm^-1出现了DDVP弱峰以及蛋白质1650 cm^-1处的强峰;PMP与cBSA偶联后,在833～790 cm^-1处和663～645 cm^-1处出现了PMP弱峰和蛋白质1650 cm^-1处的强峰。上述光谱分析结果表明,DDVP和PMP与cBSA偶联成功。2.抗DDVP和PMP多克隆抗体的制备及其性质研究以DDVP-cBSA和PMP-cBSA分别免疫BALB/c小鼠,免疫间隔为15 d,免疫3～4次后,均能有效地产生抗体。其中,抗DDVP抗血清效价在免疫7次后最高达1.6×10⁴,而抗PMP抗血清效价在免疫6次后最高达1.2×10⁴。间接竞争ELISA分析表明,两种抗血清的灵敏度分别达到473 ng/mL和482 ng/mL。3.抗DDVP单克隆抗体的制备及其性质研究以DDVP-cBSA免疫BALB/c小鼠后,取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,融合率达3.5%。在融合子中能分泌抗DDVP抗体的阳性融合子达10%。采用有限稀释法,从阳性克隆子中筛选得到一株能稳定分泌抗DDVP单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D3。其产生的抗体灵敏度为800 ng/mL。