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研究目的：GRSF1被确认为是一个高峰度含“G”的RNA靶定蛋白，其在包括RNA的转运和定位，RNA的稳定性，RNA剪切转录后调控的许多步骤中起着非常重要的作用，主要是以序列和结构特异的形式通过RNA结合域靶定特定的mRNAs来发挥其功能。最近有研究者报道，GRSF1能够与lnc-RMRP互作并可以促使lnc-RMRP定位在线粒体基质；而，lnc-RMRP是RNase MRP复合体非常重要的一个组分，并且参与酵母核糖体RNA的加工过程；这就意味着说，GRSF1可以介导非编码RNA调控核糖体RNA的加工及合成过程。我们前期的工作也已经证明GRSF1可以介导非编码小RNA，miR-346，促进其靶基因hTERT的表达并且不依赖AGO2的存在；这也将为非编码小RNA上调其靶基因提供了一种新的思路。因此，本篇论文旨在探究，GRSF1介导miRNAs上调其靶基因是否存在一定的普遍性。
研究方法：我们首先用Flag-GRSF1-RIP实验结合深度测序技术检测了Flag-GRSF1复合体中富集的一些非编码小RNAs（miRNAs），用RT-qPCR实验验证了这些富集的miRNAs的表达情况。结合测序及验证结果选择了一个新的miRNA（我们命名为miR-G-1），用Northern blot验证了该新miR-G-1的存在性，用RT-qPCR实验在宫颈癌细胞系及肿瘤组织中检测了miR-G-1的表达情况。接着，我们用MTT实验，集落形成实验，EdU嵌合实验，流式细胞术周期实验，流式细胞术凋亡实验，Transwell迁移和侵袭实验，小鼠体内移植瘤实验，免疫荧光实验，免疫组化实验，Western blot实验，细胞粘附实验，等，探究了miR-G-1的功能性作用。进一步，我们用生物学软件预测了miR-G-1的靶基因，并用EGFP荧光报告系统验证了靶基因的直接靶定作用；然后用RT-qPCR，Western blot，免疫荧光及免疫组化实验检测了各处理组及各对照组中靶基因的表达情况。接着，我们用MTT实验，集落形成实验，EdU嵌合实验，流式细胞术周期实验，流式细胞术凋亡实验，Transwell迁移和侵袭实验，免疫荧光实验，免疫组化实验和Western blot实验探究了miR-G-1的靶基因的功能，并通过String软件预测加IP及免疫荧光实验验证了其靶基因TMED5的互作蛋白。最后，我们用Western blot，免疫荧光及双荧光报告系统证实了miR-G-1可以调控WNT/β-catenin通路。
研究结果：我们通过Flag-GRSF1-RNA共沉淀-深度测序发现了一个新的miRNA，命名为miR-G-1。miR-G-1在宫颈癌患者组织，宫颈癌患者血清及宫颈癌细胞中都是高表达的。高表达的miR-G-1通过上调其靶基因TMED5促进宫颈癌细胞的增殖，迁移/侵袭，加快细胞周期和EMT进程，抑制细胞凋亡，抑制失巢凋亡，增加细胞对顺铂的抵抗力；高表达的miR-G-1能够在体内促进Ki67的表达加快裸鼠的成瘤能力；另外，我们发现TMED5可以与WNT7B互作进而激活WNT/β-catenin信号路，miR-G-1在其中发挥重要作用。高表达的miR-G-1通过上调其靶基因LMNB1促进血清饥饿诱导的宫颈癌细胞的核自噬行为，加快紫杉醇诱导的DNA损伤的修复。最重要的是，我们在shRNA敲降GRSF1的宫颈癌细胞中证实，miR-G-1上调其靶基因TMED5和LMNB1表达依赖于GRSF1的存在。
研究结论：我们发现高表达的miR-G-1促进宫颈癌细胞核自噬及恶性行为是通过上调其靶基因TMED5和LMNB1的表达来实现，而这种miRNA上调靶基因的行为依赖于GRSF1的存在，这将为miRNA上调其靶基因表达的机制研究提供一种新的思路；miR-G-1的发现也可能为宫颈癌的诊疗提供一种新的策略。
研究方法：我们首先用Flag-GRSF1-RIP实验结合深度测序技术检测了Flag-GRSF1复合体中富集的一些非编码小RNAs（miRNAs），用RT-qPCR实验验证了这些富集的miRNAs的表达情况。结合测序及验证结果选择了一个新的miRNA（我们命名为miR-G-1），用Northern blot验证了该新miR-G-1的存在性，用RT-qPCR实验在宫颈癌细胞系及肿瘤组织中检测了miR-G-1的表达情况。接着，我们用MTT实验，集落形成实验，EdU嵌合实验，流式细胞术周期实验，流式细胞术凋亡实验，Transwell迁移和侵袭实验，小鼠体内移植瘤实验，免疫荧光实验，免疫组化实验，Western blot实验，细胞粘附实验，等，探究了miR-G-1的功能性作用。进一步，我们用生物学软件预测了miR-G-1的靶基因，并用EGFP荧光报告系统验证了靶基因的直接靶定作用；然后用RT-qPCR，Western blot，免疫荧光及免疫组化实验检测了各处理组及各对照组中靶基因的表达情况。接着，我们用MTT实验，集落形成实验，EdU嵌合实验，流式细胞术周期实验，流式细胞术凋亡实验，Transwell迁移和侵袭实验，免疫荧光实验，免疫组化实验和Western blot实验探究了miR-G-1的靶基因的功能，并通过String软件预测加IP及免疫荧光实验验证了其靶基因TMED5的互作蛋白。最后，我们用Western blot，免疫荧光及双荧光报告系统证实了miR-G-1可以调控WNT/β-catenin通路。
研究结果：我们通过Flag-GRSF1-RNA共沉淀-深度测序发现了一个新的miRNA，命名为miR-G-1。miR-G-1在宫颈癌患者组织，宫颈癌患者血清及宫颈癌细胞中都是高表达的。高表达的miR-G-1通过上调其靶基因TMED5促进宫颈癌细胞的增殖，迁移/侵袭，加快细胞周期和EMT进程，抑制细胞凋亡，抑制失巢凋亡，增加细胞对顺铂的抵抗力；高表达的miR-G-1能够在体内促进Ki67的表达加快裸鼠的成瘤能力；另外，我们发现TMED5可以与WNT7B互作进而激活WNT/β-catenin信号路，miR-G-1在其中发挥重要作用。高表达的miR-G-1通过上调其靶基因LMNB1促进血清饥饿诱导的宫颈癌细胞的核自噬行为，加快紫杉醇诱导的DNA损伤的修复。最重要的是，我们在shRNA敲降GRSF1的宫颈癌细胞中证实，miR-G-1上调其靶基因TMED5和LMNB1表达依赖于GRSF1的存在。
研究结论：我们发现高表达的miR-G-1促进宫颈癌细胞核自噬及恶性行为是通过上调其靶基因TMED5和LMNB1的表达来实现，而这种miRNA上调靶基因的行为依赖于GRSF1的存在，这将为miRNA上调其靶基因表达的机制研究提供一种新的思路；miR-G-1的发现也可能为宫颈癌的诊疗提供一种新的策略。