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已有的固定化酶方法多利用物理的或化学的方法，本文旨在介绍一种利用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)孢子新型的固定化酶方法。由于酿酒酵母孢子壁具有特殊的层状结构，因此通过在孢子内表达分泌型的酶，以此来验证酿酒酵母孢子能否作为一种固定化酶的载体菌株，同时对经孢子固定化的酶所获得的一些优良特性进行分析验证，最后利用基因工程的方法，敲除一些与孢子壁合成相关基因，构建不同孢子壁缺陷型菌株，以提高固定化酶活性。实验分别在野生型(Wild type,WT)孢子和dit1Δ缺陷型孢子中分别表达含有分泌信号肽(signal sequence)的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，Gfp)，在野生型孢子中，由于其孢子壁最外层二酪氨酸的存在，Gfp能够很好的被包裹在其内；然而在dit1Δ缺陷型孢子中Gfp绝大部分渗漏到子囊中；利用含有特殊尾部(含有3个谷氨酸和2个天门冬氨酸交替连接的尾部EDEDE以及含有5个酪氨酸串联连接的尾部YYYYY)的绿色荧光蛋白也不能很好的提高其在dit1Δ缺陷型孢子中的固定化效果。实验通过利用红色荧光蛋白(red fluorescent protein，Rfp)融合标记的α-半乳糖苷酶(α-galactosidase，Mel1)在酿酒酵母孢子和营养细胞中表达定位后发现，Mel1-Rfp融合蛋白能很好的被包裹在孢子壁内，此外通过酶活性实验发现，经孢子固定化的Mel1活性很高，综合而言，α-半乳糖苷酶能被固定在孢子壁内。经过孢子微胶囊固定化的α-半乳糖苷酶获得了一些有益的性状，如抵御水解酶(蛋白酶K，β-葡聚糖酶)，耐高温，耐高盐洗脱。通过基因敲除的手段，构建的孢子壁轻微缺陷型孢子osw2Δ可以明显的提高固定化酶效果。实验还对蔗糖酶(Invertase)的固定进行了研究，在不同的突变体osw2，dit1，ydr326c，ydl186w孢子内表达蔗糖酶基因SUC2，以蔗糖(sucrose)和棉籽糖(raffinose)分别为底物发现，孢子对蔗糖的催化能力要远高于棉籽糖，这说明了经过孢子微胶囊固定化的蔗糖酶对底物具有选择性。总之，我们基本证实了，孢子是一种可用于固定化酶的新型介质，具有十分新颖独特的性质。