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禽白血病(avian leukosis, AL)是一种能引起禽类免疫抑制的肿瘤性疾病,由禽白血病病毒(avian leukosis virus, ALV)引起,其中J亚型禽白血病病毒(subgroup J ALV, ALV-J)是目前养鸡业最为常见、危害最为严重的亚群。鸡群感染ALV后,可能会出现生产性能降低、免疫水平下降、出血、肿瘤和生长迟缓等病症。目前并没有很好的预防和治疗ALV感染的疫苗和药物,主要依赖种群的净化。为了辅助净化工作,课题组构建了一个DNA疫苗和一个RNAi的重组腺病毒,本课题将通过动物试验来验证它们的实际效果。另外从临床发病鸡分离鉴定了一株ALV-J并进行了全基因序列分析。本课题从广东某鸡场临床发病的病鸡体内采集病料,应用DF-1细胞培养分离病毒,通过对培养物的IFA、ELISA和PCR检测,确定获得一株ALV-J,命名为GDMMo通过特异性引物扩增获得并完成了对该分离株的全基因组序列测定,经与14个来自两广地区的分离株及国内其他地方的参考株进行比较分析,发现该分离株与广西分离株GX14ZS14、GX14HG04及广东参考株GDQY1201等之序列的相似性很高,尤其与GX14ZS14株的核苷酸相似性高达96.8%,且系统进化树上与GX14ZS14亲缘关系最近,同属一分支。为验证课题组制备的RNAi重组腺病毒pAd-gp85-shRNA2对鸡体内ALV-J感染的干扰效果,选择蛋清p27抗原阳性且血浆病毒分离呈阳性的种鸡群作为实验对象,其中实验组(28只产蛋母鸡)接种重组腺病毒100μL (1.6×109PFU)／只、对照组(28只产蛋母鸡)注谢PBS 100μL。分别检测试验前后母鸡的体重、其后代雏鸡胎粪的p27抗原阳性率；同时在试验后采集母鸡的蛋清进行p27抗原检测和抗凝血进行病毒分离培养；接种后每周采集实验组和对照组各5只母鸡的抗凝血和分泌物,对ALV-J和重组腺病毒分别进行定量检测。结果发现,实验组和对照组母鸡的体重无显著差异；实验组母鸡蛋清p27抗原阳转阴和血毒阳转阴的个体均为25%,后代雏鸡胎粪p27抗原阳转阴的个体有19%；在接种后2w,母鸡体内的ALV-J拷贝数最少、重组腺病毒对ALV-J的干扰效率也最高,可达68%；接种后4w,母鸡体内仍可检测到重组腺病毒,与接种后4w时实验组ALV-J拷贝数比对照组少的结果相一致,说明重组腺病毒在接种后4w仍能对母鸡体内的ALV-J发挥干扰作用。为验证课题组构建的DNA疫苗PVAX1-Ub1-gp85-p27-p10诱导接种母鸡产生抗体及其后代雏鸡产生母源抗体的效果,选择蛋清p27抗原检测阴性且ALV-J抗体也是阴性的产蛋母鸡作为实验对象。实验组(25只产蛋母鸡)接种DNA疫苗、对照组(25只产蛋母鸡)注射PBS,2w后以同样剂量重复注射一次。试验前后分别称量母鸡的体重、检测免疫母鸡血清中的抗体及其后代雏鸡血清中ALV-J的母源抗体。结果发现,实验组与对照组母鸡的体重无显著差异,有28%的免疫母鸡(7只)和8%(2只)母鸡之后代小鸡的抗体出现阴转阳。本课题研究的结果表明,从临床发病鸡成功分离到一株ALV-J并完成了其全基因序列的测定与分析；通过动物试验证明,课题组研发的重组腺病毒介导的RNAi能有效地干扰ALV-J在鸡体内的复制；研发的DNA疫苗可刺激产蛋母鸡产生抗体并诱导其后代雏鸡母源抗体的生成。