在诱抗剂HI能够提高水稻R6耐盐能力的基础上，本实验针对水稻R6诱导耐盐相关基因P450作为研究的目标基因，通过“功能基因扩增多态性”(FGAP)标记方法，分析基因组DNA与转录后基因表达(cDNA序列)的多态性，并对特殊的条谱进行凝胶回收测序，分析其特异性。实验主要结果如下： 1.药物处理下的水稻形态表现 与H2O对照相比，盐胁迫下水稻的根长受到了明显的抑制，根色发黄，短而粗，苗高比亲本要矮小。与1％NaCl胁迫相比，经过诱抗剂HI预处理后，根长得到了诱导，根色变白，比水的粗比盐的细，苗高分别介于同一类型植株H2O和盐处理之间。与盐胁迫对照相比，红霉素、西咪替丁抑制苗高和根长，利福平促进苗高抑制根长，环孢素A促进根长且幼苗比盐处理稍高。 2.采用六种方法提取DNA，结果显示液氮研磨法、SDS法、CTAB法所得的基因组DNA效果较好，但在DNA浓度上明显小于优化SDS法；优化CTAB法所提取的基因组DNA虽然浓度较大，但纯度较差，拖尾较严重；试剂盒提取得到的基因组DNA纯度高，DNA量也很充足，并且没有RNA污染。 3.不同处理的P450基因cDNA序列多态性分析 3.1反应体系的优化结果。本文改良了陈晓[79]的反转录体系，将Oligodt引物量由2μl改为1μl，同时在反应条件中增加了25℃温浴10min后再进行42℃的恒温反应，得到的反转录产物更为完整，actin引物检测时得到的特异条带更亮更集中。针对cDNA的PCR反应体系特点，进一步改良了朱志凯[74]和陈晓[79]的PCR反应体系，根据条带重新优化体系，包括反应体系的成分用量以及反应条件。最终优化PCR反应体系：20μl PCR反应体系中，含60ng模板cDNA，1μl20mM dNTP，0.5 U TaqDNA聚合酶，2.5μl10pM随机引物和3.5μL10pM特异引物，复合退火温度为随机引物35℃，特异引物55℃。 3.2对目的基因的退火温度及循环数的筛选，T2、T7、T15、P7、P8、P9、P11、P15的最佳退火温度分别为58℃、55℃、55℃、58℃、55℃、58℃、58℃、58℃，最佳循环次数分别为34、32、32、34、34、36、34、32。 3.3筛选引物组合。筛选与光合速率显著相关的组合进行基因组以及cDNA序列多态性检测，共筛选出30对引物组合，分别对水稻R6三种处理(清水、盐及HI)条件下提取的DNA进行扩增及RNA进行RT-PCR扩增，产生多态性条带242条，多态性达75％，大多数条带集中在100-600bp。 3.4聚丙烯酰胺凝胶电泳回收。改进了聚丙烯酰胺凝胶回收的方法，将煮沸法融合到一步法中，用特异引物T7和T2扩增，得到了158bp和226bp两条清晰条带。 4.在盐胁迫条件下CsA诱导水稻NM001066006基因发生选择性剪接。本实验首次发现用一种功能基因扩增多态性(Functional Genes Amplified Polymorphism，FGAP)方法中的组合引物对P3P2，进行cDNA序列扩增，在CsA作用下，简便有效地区分NM_001066006和NM_001066009的表达，并对图11，12中约530 bp条带是在NM_001066006中处于195 bp内含子，而在NM_001066009中却处于102 bp外显子作出合理的解释，可见水稻P450基因对药物CsA有明显作用，因而在水稻中利用CsA研究P450基因、MDR基因与抗逆性的相互作用值得深入探讨。而FGAP为mRNA选择性剪接的研究提供了一个简便有效方法。 5.对19450基因特异条带回收测序分析。回收条带进行PCR扩增，由上海英俊生物技术有限公司测序，测序结果显示，用H2O、S、HI处理后，不同处理的cDNA序列与NM_190966相同的碱基占70％；在NM_190966基因编码序列1042bp处，清水和HI处理的水稻R6材料发生了一个碱基的缺失；在NM_190966基因编码序982-1458处，水稻R6材料发生了65个碱基变异，其中AC1079CA明显是颠换的结果；但有8个碱基是在盐胁迫下发生改变，经过HI处理后有33个碱基发生了改变，测序结果分析与电泳基本一致。这种现象是水稻R6个体间DNA差异或是盐胁迫与诱抗剂HI诱导作用产生的RNA编辑的结果?有待进一步研究。