背景与目的：肝纤维化（hepatic fibrosis）是慢性肝病向肝硬化发展的必经环节。目前研究认为肝纤维化属于可逆性病变，因此阻止和延缓肝纤维化的发生、发展则是治疗肝硬化的关键。 肝纤维化是由于细胞外基质（extracelluar matrix，ECM）在肝内过多沉积的结果；肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）激活是肝纤维化过程的中心事件，激活的HSC可合成大量的ECM沉积在肝组织中，Ⅰ、Ⅲ型胶原为其主要组成成分；转化生长因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）是HSC活化并向肌成纤维细胞（myofibroblast，MFB）转化的最重要的促进因子，其信号传入依赖于其受体后信使分子SMAD蛋白来完成，即TGF-β/SMAD信号通路。Smad7是TGF-β/SMAD信号通路中的重要负性调节因子，通过抑制TGF-β的信号转导发挥抗肝纤维化作用。目前有研究表明smad7可抑制Ⅰ型前胶原转录，但关于Smad7对Ⅲ型前胶原表达的影响少有报道。 本研究利用分子克隆技术构建鼠Smad7真核表达重组质粒，采用四氯化碳复合法制备大鼠肝纤维化模型，以脂质体为载体将构建的鼠Smad7重组质粒介导转染肝纤维化模型大鼠。运用western-blot定量检测Smad7蛋白的表达，观察外源Smad7基因能否有效转染并表达；运用VG染色和HE染色法观察组织病理学改变，了解外源Smad7基因对大鼠肝纤维化模型病理组织学改变的影响；运用免疫组化半定量检测Ⅲ型胶原纤维表达，观察外源Smad7基因对大鼠肝纤维化模型Ⅲ型胶原纤维表达的影响。分析Smad7/pcDNA3.1（+）真核细胞表达质粒对实验性大鼠肝纤维化发生、发展的影响。最终希望寻求一种防止和延缓各种慢性肝病肝纤维化和肝硬化发生、发展的有效方法并为肝纤维化的基因治疗奠定理论基础。 材料与方法：利用本课题组前期构建的smad7真核细胞表达质粒感受态细菌，使用上海生物工程公司UNIQ-500大剂量质粒试剂盒制备大剂量的Smad7/pcDNA3.1（+）真核细胞表达重组质粒。以脂质体Lipofectmine2000为载体将质粒介导转染肝纤维化模型大鼠，通过琼脂糖凝胶电泳观察摸索Smad7/pcDNA3.1（+）重组质粒及pcDNA3.1（+）质粒与脂质体的配比关系。以经认证的同期出生、正常纯种系雄性SD大鼠作为实验对象。大鼠购回后适应性饲养2周开始实验，实验大鼠随机分为4组：正常对照组（A组）、肝纤维化模型对照组（B组）、smad7质粒治疗组（C组）、空质粒组（D组）、每组20只。采用四氯化碳复合法制备大鼠肝纤维化模型。实验进行两周后，各组随机取材一只大鼠，病理学诊断确定受攻击组大鼠进入肝纤维化后，进行干预治疗。smad7质粒治疗组（C组）给予smad7/pcDNA3.1（+）重组质粒，每次100μg，每9天1次至第8周，共腹腔注射5次，空质粒组给予pcDNA3.1（+）空质粒治疗，方法及剂量同C组。8周后取材大鼠做以下相关检测，比较各组实验大鼠的体重及肝重，Western-blot法检测各实验组大鼠肝组织中smad7蛋白的表达，免疫组化检测Ⅲ型胶原纤维的表达情况，并做半定量分析，应用HE，VG染色法观察肝组织病理形态学变化，进行病理组织学诊断，使用SPSS11.5软件分析描述实验数据特征，计量资料做方差分析，等级资料作Ridit分析。 结果： 1.Ⅲ型胶原纤维的表达治疗组与模型对照组和空质粒组比较，表达量下降，差异有统计学意义（P<0.05）。各组与正常组比较，表达量增加，差异有显著性（P<0.01）。 2.Smad7蛋白的表达治疗组相比较于模型对照组和空质粒组，表达上调，差异具有统计学意义（P<0.05）；各组表达量均显著低于正常组，差异有显著性（P<0.01）。 3.肝纤维化模型组和空质粒组比较，Ⅲ型胶原纤维及smad7蛋白的表达量无显著性差异（P>0.05）。 结论： 1.成功利用四氯化碳复合法制备大鼠肝纤维化模型。 2.以脂质体Lipofectmine2000为载体将smad7/pcDNA3.1（+）真核细胞表达质粒成功转染到大鼠肝组织中。 3.smad7/pcDNA3.1（+）真核细胞表达质粒可减少细胞外基质（ECM）的合成，减轻肝纤维化的发展，并验证了TGF-β/Smad信号通路的存在。 4.可利用Smad7抑制TGF-β的信号转导，从而有效抑制延缓肝纤维化的发生、发展，为寻求抑制和延缓慢性肝病肝纤维化发生、发展的有效方法提供了新思路。