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前言心肌缺血再灌注(Ischemic reperfusion,I/R)损伤是临床实践中常见的组织器官损伤,其准确机制仍不十分清楚。研究结果表明心肌缺血再灌注损伤是一种急性炎症反应,其中缺血再灌注激活了Janus激酶信号转导子与转录激活子信号转导通路(Janus kinas signalt transducers and activators of transcriptions,JAKS-STATS)系统,研究证实,STAT-1产生增加是导致心脏功能障碍和心肌细胞坏死的重要原因之一,同时STAT-3的表达增加能显著的减轻心肌细胞损伤,有助于缺血时改善了心功能,减少了梗死面积和凋亡细胞数。近年来,对I/R损伤机制的研究日益深入,对未成熟心肌保护的认识进一步加深,提出了一些新的保护策略。其中,促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)的心肌保护作用引起了人们的关注。本研究应用Langendorff离体幼兔心脏工作模型,排除了神经体液及外周血管阻力等因素对药物作用的影响,观察EPO注射液对未成熟心肌缺血再灌注损伤是否具有保护作用,并探讨其保护作用的可能机制。材料与方法出生14～21d的日本长耳大白兔32只(中国医科大学附属盛京医院动物室提供),体重210～300g,雌雄不限。32只幼兔按随机数字表法分为4组,每组8只。A组为对照组,B1、B2、B3组均为EPO预处理组。在模型建立前24小时,EPO预处理组分别经腹腔注射不同剂量的EPO(沈阳三生药业有限公司生产),B1组3000U/Kg,B2组5000U/Kg,B3组7000U/Kg,对照组经腹腔注射等量生理盐水。实验时幼兔腹腔注射10%乌拉坦10ml/Kg麻醉,腹腔注射肝素钠500IU抗凝。胸正中切口开胸并迅速取出心脏,立即浸入4℃K-H液中,经主动脉插管以后连接于自制Langendorff离体心脏灌注装置上,以37℃K-H液逆行灌注,灌注压恒定为60mmHg。经15min的自然灌流平衡后,对照组及EPO组均用4℃St.ThomasⅡ停搏液进行停搏。四组心脏经低温(12±1)℃停搏30min后,以37℃K-H液再灌注至复跳后120min。实验结束后留取部分左心室心肌立即放入4%多聚甲醛中,固定后制成腊块标本;另取部分左心室心肌于-70℃冰箱冰冻保存。分别计量缺血前与缺血再灌注30min、缺血再灌注60min、缺血再灌注120min的冠脉流出液量,并留取各时点流出液2ml,实验中置于常温冰箱保存,实验结束后立即用全自动生化检测仪检测其肌酸激酶及乳酸脱氢酶的含量;待全部实验结束后将石蜡块切片,应用免疫组化方法观察心肌再灌注120min STAT-3及Bcl-2表达。采用SPSS13.0统计软件进行数据处理,计量资料以均数±标准差((?)±s)表示,组间比较采用重复测量数据的方差分析,两两比较用多重比较t检验,P＜0.05为差异有统计学意义。结果1、冠脉流出液流量的变化:与对照组相比,EPO组缺血再灌注后冠脉流出液流量明显增加(P＜0.05),EPO预处理组3组比较,B2,B3两组间差别无统计学意义;但与B1组比较,B2,B3两组明显降低,差异有统计学意义。2、冠脉流出液中肌酸激酶及乳酸脱氢酶的变化:与对照组相比,EPO组缺血再灌注后各时间点的肌酸激酶及乳酸脱氢酶值明显降低(P＜0.05)。EPO预处理组3组比较,B2,B3两组间差别无统计学意义;但与B1组比较,B2,B3两组明显降低,差异有统计学意义。3、心肌组织STAT-3及Bcl-2的表达变化:A组基本无表达,EPO组缺血再灌注后的STAT-3及Bcl-2表达明显增多;EPO预处理组3组比较,B2,B3两组的差异不明显;但较B1组明显增多。结论1、EPO预处理可明显减轻心肌缺血再灌注损伤,对未成熟心肌具有一定的心肌保护作用。2、5000U/kg,7000U/kg预处理保护作用无明显差异,但明显优于3000U/kg预处理,有统计学意义。3、EPO预处理通过显著提高心肌组织STAT-3及Bcl-2抗凋亡基因的表达来实现其对心肌的心肌保护作用。