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冠心病是最为常见和最多发的一种慢性心血管疾病，是发达国家和多数发展中国家中老年人群发病和死亡的主要原因。目前冠心病的病因及发病机制尚未阐明，随着对冠心病病因和发病机制的深入研究，人们发现40%～50%的冠心病归因于遗传因素。然而，在冠心病发生中起决定作用的遗传因子还不清楚。因此，从基因水平探讨冠心病发病的遗传易感机理成为目前研究的热点。近年来，国内外学者应用全基因组关联研究发现了许多与冠心病相关联的疾病易感区域和位点，其中以染色体9p21区域最受关注。本研究以中国北方汉族冠心病患者和健康对照为研究对象，收集病例和对照血样，对染色体9p21区域冠心病风险位点基因多态性及其相邻基因表达情况进行检测，探讨该区域遗传变异及相邻基因表达与中国北方汉族人群冠心病的关系；并测定不同基因型对CDKN2A、CDKN2B、ANRIL和MTAP基因转录和翻译的影响，探讨该区域遗传变异影响中国北方汉族人群冠心病发生的可能机制。本研究对揭示冠心病的病因和发病机制具有重要意义。本研究共分为以下三个部分：第一部分染色体9p21区域遗传变异与冠心病的关系目的：明确染色体9p21区域rs2383206、rs2383207、rs10757274、rs10757278和rs1333049与中国北方汉族人群冠心病的关系。方法：选择2009年～2012年在吉林省某三甲医院确诊并进行住院治疗的冠心病患者为病例组；选择同期在该院体检中心健康体检的正常人为对照组。病例组和对照组样本量分别为583例和540例。两组人群均为中国北方汉族人，且个体间无血缘关系，性别、年龄相匹配。经知情同意后，采集冠心病患者及对照个体空腹抗凝静脉血5mL用于DNA提取。选择染色体9p21上rs2383206、rs2383207、rs10757274、rs10757278和rs1333049位点为待测位点，采用Sequenom MassArray系统进行基因分型。并收集研究对象的流行病学资料。采用SPSS16.0统计软件进行一般资料、等位基因、基因型与冠心病的关联性分析以及SNPs和冠心病危险因素的关联分析；采用Haploview软件进行连锁不平衡分析；采用UNPHASED软件分析单倍型和联合基因型与冠心病的关系。结果：1.吸烟、腰臀比、高血压病史和糖尿病史在两组人群间差异显著，具有统计学意义（P＜0.05）。吸烟、高血压病史和糖尿病史在冠心病患者中所占的比例显著高于对照组人群；冠心病患者的腰臀比显著高于对照组人群。2. rs1333049位点等位基因在病例组和对照组人群中的分布具有显著性差异（P＜0.05），G等位基因携带者患冠心病的危险度是C等位基因携带者的0.923倍；rs2383206位点等位基因在病例组和对照组人群中的分布具有显著性差异（P＜0.05），G等位基因携带者患冠心病的危险度是A等位基因携带者的1.097倍；rs2383207位点基因型和等位基因在病例组和对照组人群中的分布均具有显著性差异（P＜0.05），AG基因型和GG基因型携带者患冠心病的危险度分别是AA基因型携带的1.104和1.122倍，G等位基因携带者患冠心病的危险度是A等位基因携带者的1.081倍；rs10757274位点基因型和等位基因在病例组和对照组人群中的分布均具有显著性差异（P＜0.05），GG基因型携带者患冠心病的危险度是AA基因型携带的1.287倍，G等位基因携带者患冠心病的危险度是A等位基因携带者的1.126倍；rs10757278位点基因型和等位基因在病例组和对照组人群中的分布均具有显著性差异（P＜0.05），AG基因型和GG基因型携带者患冠心病的危险度分别是AA基因型携带的1.123和1.229倍，G等位基因携带者患冠心病的危险度是A等位基因携带者的1.111倍。3.染色体9p21区域rs2383206、rs2383207、rs10757274、rs10757278和rs1333049位点紧密连锁。当存在2个冠心病的风险等位基因时，冠心病的发病风险将提高；rs10757274和rs10757278位点以及rs2383206和rs2383207位点存在2种冠心病风险等位基因型时，冠心病的发病风险将提高。4.在对照组人群中，rs10757274和rs10757278位点GG基因型携带者TC水平显著低于AA基因型携带者（P＜0.05），rs1333049位点GG基因型携带者TC水平显著高于CC基因型携带者（P＜0.05），而在冠心病患者中并无此差异（P＞0.05）；在病例组人群中，rs2383206位点GG基因型冠心病患者TC水平显著低于AG基因型携带者（P＜0.05），而在对照组人群中并无此差异（P＞0.05）。5.在病例组和对照组人群中，rs2383207、rs10757274、rs10757278、rs1333049和rs2383206位点不同基因型携带者的糖尿病史和高血压史均无显著差异（P＞0.05）。6.染色体9p21区域rs2383207、rs10757274、rs10757278、rs1333049和rs2383206位点遗传变异在早发型冠心病和迟发型冠心病发生中的作用并无显著差异（P＞0.05）。结论：1.吸烟、腰臀比、高血压病史和糖尿病史可能是冠心病的危险因素。2.染色体9p21区域rs2383207、rs10757274、rs10757278、rs1333049和rs2383206位点是中国北方汉族人群冠心病的易感位点；rs1333049位点C等位基因和rs2383207、rs10757274、rs10757278、rs2383206位点的G等位基因是冠心病的危险等位基因；rs2383207位点AG基因型和GG基因型、rs10757274位点GG基因型和rs10757278位点AG基因型和GG基因型是冠心病的危险基因型。3.染色体9p21区域存在2个冠心病的风险等位基因时，冠心病的发病风险将提高；rs10757274和rs10757278位点以及rs2383206和rs2383207位点存在2种冠心病风险等位基因型时，冠心病的发病风险将提高。4.染色体9p21区域rs10757274位点和rs10757278位点GG基因型、rs1333049位点CC基因型以及rs2383206位点AG基因型可能是通过影响基因型携带者的总胆固醇水平而影响冠心病发生。5.染色体9p21区域rs2383207、rs10757274、rs10757278、rs1333049和rs2383206位点遗传变异影响冠心病发生的机制可能与TG和GLU代谢无关；也与高血压疾病史或糖尿病疾病史无关。6.染色体9p21区域rs2383207、rs10757274、rs10757278、rs1333049和rs2383206位点遗传变异在早发型冠心病和迟发型冠心病发生中的作用并无显著差异。第二部分染色体9p21冠心病风险位点相邻基因mRNA表达与冠心病的关系目的：明确染色体9p21冠心病风险位点相邻基因mRNA表达与冠心病的关系；阐明染色体9p21区域遗传变异对其相邻基因mRNA表达水平的影响。方法：选择2012年在吉林省某三甲医院确诊并进行住院治疗的91例冠心病患者为病例组；选择同期在该院进行诊治的非冠心病患者30例为对照组。对照组人群性别和年龄与冠心病患者相匹配。经知情同意后，采集冠心病患者和对照人群入院时的新鲜静脉抗凝血2mL用于RNA的提取。以CDKN2A、CDKN2B、MTAP和ANRIL基因为候选基因，采用实时荧光定量PCR方法对候选基因mRNA的表达水平进行测定。采用SPSS16.0进行统计分析。结果：1.与对照组人群相比，冠心病病患者外周血中CDKN2A、CDKN2B mRNA的表达水平显著降低（P＜0.05）；MTAP mRNA的表达水平显著升高（P＜0.05）；ANRIL mRNA在病例组和对照组人群间的表达水平无显著差异（P＞0.05）。2. rs2383207位点不同基因型冠心病患者外周血CDKN2A表达水平差异显著，具有统计学意义（P＜0.05）；CDKN2B、MTAP和ANRIL表达水平均无显著差异（P＞0.05）。rs2383206、rs1333049、rs10757274和rs10757278位点不同基因型患者外周血CDKN2A、CDKN2B、MTAP和ANRIL表达水平均无显著差异（P＞0.05）。结论：1. CDKN2A和CDKN2B mRNA水平降低，MTAP基因的mRNA表达水平升高可能与中国北方汉族人群冠心病的发生相关。2.染色体9p21区域rs2383207位点的遗传变异可能是通过影响冠心病患者外周血中CDKN2A mRNA的表达水平而影响了冠心病的发生。3.染色体9p21区域rs10757274、rs10757278、rs1333049和rs2383206位点的多态性可能与冠心病患者外周血中CDKN2A、CDKN2B、MTAP和ANRIL mRNA的表达水平无关。第三部分染色体9p21冠心病风险位点相邻基因蛋白表达与冠心病的关系目的：明确染色体9p21冠心病风险位点相邻基因蛋白表达水平与冠心病的关系；阐明染色体9p21区域遗传变异对其相邻基因蛋白表达水平的影响。方法：选择2012年在吉林省某三甲医院确诊并进行住院治疗的55例冠心病患者为病例组；选择同期在该院进行健康体检的正常人15例为对照组，对照组人群性别和年龄均与冠心病患者相匹配。经知情同意后，采集两组人群的静脉抗凝血2mL用于总蛋白的提取。以CDKN2A、CDKN2B和MTAP基因为候选基因，采用western blot方法对候选基因表达的蛋白p14ARF、p15INK4b、MTAP的水平进行测定。用Image J2x软件对蛋白质进行半定量分析。采用SPSS16.0统计软件包进行统计学分析。结果：1.对照组人群和冠心病患者外周血中p14ARF、p15INK4b、MTAP水平无显著差异（P＞0.05）。2. rs2383207位点不同基因型冠心病患者携带者外周血MTAP水平差异显著（P＜0.05），其中AG和GG基因型携带者外周血中MTAP水平较AA基因型携带者显著升高；p14ARF、p15INK4b水平无显著差异（P＞0.05）。3. rs2383206、rs1333049、rs10757274和rs10757278位点不同基因型冠心病患者外周血中p14ARF、p15INK4b、MTAP水平均无显著差异（P＞0.05）。结论：1.冠心病患者外周血中p14ARF、p15INK4b、MTAP水平并未发生显著改变。2.染色体9p21区域rs2383207位点可能是通过上调MTAP的表达而影响冠心病发生的。3.染色体9p21区域rs10757274、rs10757278、rs1333049和rs2383206位点的多态性可能与冠心病患者外周血中p14ARF、p15INK4b、MTAP水平无关。