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目的:骨肉瘤(Osteosarcoma,Os)是儿科和青少年最常见的原发性恶性骨肿瘤之一,一种罕见的间质肿瘤,主要发生在长骨干骺端,尤其是股骨远端、胫骨近端和肱骨。骨肉瘤约占原发性骨恶性肿瘤的20%,占恶性肿瘤的0.5%。骨肉瘤多发生在骨骺区,骨骺区血供丰富,血行转移发生率高,发生早,进展快。以前的研究表明,如果不及时治疗,80%的骨肉瘤患者会发展为肺转移,这通常是致命的。目前,用于治疗骨肉瘤的药物包括阿霉素、异环磷酰胺、甲氨蝶呤和顺铂。有些患者化疗后预后差或耐药,尽管有不同的治疗组合,但均难以改善。此外,高剂量的化疗药物有副作用。因此,深入探讨研究骨肉瘤发生发展的机制,并进一步的寻找靶点为骨肉瘤基因治疗提供实验依据。本研究目的在于探讨TRIP6是否通过NF-κB信号通路影响骨肉瘤细胞的某些行为学。例如侵袭、迁移、增殖和凋亡。方法:首先根据说明书的要求配置培养基,再用事先配置好的培养基培养U2OS和MG63两种骨肉瘤细胞系。通过构建人四质粒,分别为sh RNA-TRIP6质粒、sh NC质粒、pcDNA Flag TRIP6质粒和p EX-1质粒。sh RNA-TRIP6质粒组为沉默TRIP6组,pcDNA Flag TRIP6质粒组为TRIP6过表达组,sh NC质粒组为沉默TRIP6组的对照组,p EX-1质粒组为TRIP6过表达组的对照组。采用Western blot技术分别检测TRIP6在骨肉瘤细胞系U2OS和MG63中转染各组质粒后的表达情况。各组细胞的增殖能力采用MTT试验检测。利用流式细胞术实验检测细胞凋亡情况。利用Transwell侵袭试验检测细胞侵袭能力,利用Transwell迁移试验检测细胞迁移能力。结果:两种人的骨肉瘤细胞系U2OS和MG63转染构建各种实验组和对照组的质粒后,通过WB实验结果发现:对于转染p EX-1质粒的对照组,转染pcDNA Flag TRIP6质粒的实验组中TRIP6的表达水平明显升高;对于转染sh NC质粒的对照组,转染sh RNA-TRIP6质粒的实验组中TRIP6的WB实验结果的灰度值降低明显。通过SPSS软件分析,两组的灰度值具有统计学意义,P值小于0.05。MTT试验结果显示,相对于对照组而言,转染pcDNA Flag TRIP6质粒的U2OS和MG63细胞吸光度值增强明显,在两种人的骨肉瘤细胞系U2OS和MG63转染sh RNA-TRIP6质粒后,两种细胞的吸光度值减弱明显,两组的灰度值具有统计学意义,P值小于0.05。利用流式细胞术,其结果显示:相对于MG63?Vector组而言,MG63?TRIP6?flag组的U2OS和MG63细胞凋亡率降低明显;相对于U2OS?NC组而言,U2OS-TRIP6-si RNA组的U2OS和MG63细胞凋亡率增高明显。MG63?Vector组和MG63?TRIP6?flag组及U2OS?NC组和U2OS-TRIP6-si RNA组每两组的凋亡率均具有统计学意义,P值小于0.05。利用Transwell实验检测迁移和侵袭能力,其结果表明,相对于MG63?Vector组而言,MG63?TRIP6?flag组的U2OS和MG63细胞迁移能力、侵袭能力增强明显,相对于U2OS?NC组而言,U2OS-TRIP6-si RNA组的U2OS和MG63胞迁移能力、侵袭能力减弱明显,每两组的迁移和侵袭均具有统计学意义,P值小于0.05。结论:在本实验中,我们成功的在人的骨肉瘤细胞系U2OS和MG63细胞系中转染了sh RNA-TRIP6质粒和pcDNA Flag TRIP6质粒。我们通过了一系列实验(MTT实验、Transwell迁移试验、侵袭试验和流式细胞术)证明了TRIP6是能够促进人的两种骨肉瘤细胞U2OS和MG63的增殖、迁移、侵袭,但抑制了他们的凋亡率。这些结果可以间接的表明在后期的临床上可以抑制TRIP6基因作为骨肉瘤治疗的一种有效的方法,在此基础上我们进一步的探讨了TRIP6是通过何种途径影响骨肉瘤的发生发展,为靶向TRIP6治疗骨肉瘤提供理论基础。