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研究背景:慢性心力衰竭(Chronic heart failure,CHF)作为21世纪严重危害人体生命健康的主要疾病之一,它是各种心血管疾病的最终战场,具有预后差,再住院率高,猝死风险较大等特点。普遍认识为心衰病的病理特点主要表现在心室重构,而心室重构的主要病理特点是心肌组织出现纤维化改变。现代研究发现心肌纤维化的发生与多种因素相关,而转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)的促进心肌纤维化的生物学效应已普遍被大家所认识。TGF-β1作用于心肌成纤维细胞(Cardiac fibroblasts,CFs)后,CFs活性增加明显、胶原大量沉积,从而引起细胞外基质(Extracellular matrixc,ECM)合成与降解失衡的途径,介导着心肌纤维化发生的过程,从而参与到心室重构的病理过程之中。因此选择可以对心肌纤维化有效干预的药物是延缓心室重塑进程的关键。研究目的:通过对新生大鼠心肌成纤维细胞的培养,观察加参方对TGF-β1诱导的CFs细胞增殖、胶原分泌及向肌成纤维细胞分化的影响;观察加参方对TGF-β1诱导的CFs分泌的Smad2/3 m RNA、磷酸化Smsd2/3蛋白表达量的调控作用,同时对加参方干预心肌纤维化的作用机制进行初步探讨。方法:1.新生大鼠心肌成纤维细胞的分离与培养2.心肌成纤维细胞形态学观察及鉴定3.实验分组及干预:加参方浓度筛选分组:(1)0 mg/m L加参方组(2)0.25 mg/m L加参方组(3)0.5 mg/m L加参方组(4)1.0 mg/m L加参方组;指标检测分组:(1)正常组(正常培养)(2)模型组(10ng/m LTGF-β1)(3)加参方组(10 ng/m LTGF-β1+0.25 mg/m L加参方药液)4.CCK-8细胞计数法检测细胞代谢活性5.免疫荧光法检测α-SMA、Ⅰ型胶原的荧光表达水平6.羟脯氨酸试剂盒检测羟脯氨酸含量7.RT-PCR检测Smad2、Smad3 m RNA的表达水平8.Western-blot检测磷酸化Smad2、磷酸化Smad3蛋白的表达水平结果:1.新生大鼠心肌成纤维细胞的培养情况2.新生大鼠心肌成纤维细胞的鉴定3.加参方原液干预浓度筛选4.CCK-8法检测加参方对CFs细胞活性的影响5.免疫荧光法检测加参方对α-SMA、Ⅰ型胶原含量的影响6.羟脯氨酸试剂盒测定加参方对CFs羟脯氨酸含量的影响7.RT-PCR检测加参方对CFs Smad2/3 m RNA表达的影响8.Western-blot法检测加参方对CFs P-Smad2/3蛋白表达的影响结论:1.TGF-β1作用新生大鼠心肌成纤维细胞后,可建立离体心肌纤维化模型。2.加参方浸膏对以TGF-β1为刺激因子建立的离体心肌纤维化模型具有显著抑制作用。3.根据本实验结果,我们推测加参方可以抑制心肌纤维化的发展,其机制可能与加参方对TGF-β1/Smads信号通路的干预作用相关。