泌尿生殖道沙眼衣原体(Ct)感染的临床症状轻微，但可引起严重的合并症，如异位妊娠和不育症等。因而，敏感、快速的实验室诊断方法，对于早期诊断和及早治疗衣原体感染是至关重要的。Ct的血清分型方法费时、昂贵，现代分子生物学技术为敏感、快速地分型鉴定Ct，研究其基因变异情况提供了有力工具。本论文应用细胞培养法、聚合酶链反应(PCR)、限制性片段长度多态性(RFLP)和基因克隆等技术，对泌尿生殖道Ct感染的检测和基因分型做了一系列研究。 1．为了适用于检测大量标本，建立了微量细胞培养法。用96孔平底细胞培养板代替传统的玻璃瓶，具有敏感、快速、方便、经济的特点。用微量细胞培养法对南京地区683例性病门诊病人，107例非淋菌性尿道炎患者和176名性罪错妇女进行了Ct的检测。这三组人群的Ct感染率分别为7.9％、24.3％和21.6％。并对部分衣原体培养阳性病人做了临床分析。 2．为了简化PCR操作中的标本处理程序，摸索出一种用稀碱溶液快速处理尿道、宫颈拭子标本的方法。只需加入低浓度NaOH溶液于标本中，离心、加热两个步骤，15分钟处理1份标本，获得了与非离子去污剂和蛋白酶K相似的处理效果。对总共576份宫颈和尿道拭子标本分别进行了培养和质粒PCR检测，两法结果相异的标本，用主要外膜蛋白基因(omp1)PCR进行分析。结果表明PCR和培养法检测Ct的敏感性分别为97.0％～100％和86.4％～87.9％，特异性分别为98.5％～99.7％和100％。PCR的阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)分别为95.7％～96.7％和99.7％～100％。建立了PCR检测男性尿标本的方法，对100名性病门诊男性病人进行了尿标本PCR和尿道拭子培养的比较。结果尿PCR和培养的敏感性分别为92.3％和84.6％，特异性分别为98.9％和100％。PCR的PPV为92.6％，NPV为98.9％。研究表明：PCR在检测性病高危人群的泌尿生殖道标本和男性尿标本Ct时，具有极好的敏感性，可作为一种培养的替代方法。本文还探讨了PCR在临床诊断Ct感染中的应用价值。 3．为了深入研究Ct的致病机理，尤其是Ct的潜伏感染，建立一种竞争性定量PCR检测Ct的方法。设计合成并克隆、定量了一与靶序列具有相同引物位点的内参标(IS)，通过共同扩增已知数量克隆的omp1靶序列和IS，构建竞争性PCR标准曲线。恒定拷贝数(1000个分子)的IS与每一待测模板共同扩增，用靶序列与IS的PCR产物密度比值来定量标本中的Ct。与细胞培养法比较发现，一个包涵体形成单位大约相当于75个DNA分子。