【摘 要】
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本报告以人乳铁蛋白(hLF)转基因小鼠研究为主要内容,对BAC大片段转基因进行了研究.对147KB的BAC大段进行提取、酶切、纯化处理,得到具有70KB 5端侧翼序列,35KB3端侧翼序列的
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本报告以人乳铁蛋白(hLF)转基因小鼠研究为主要内容,对BAC大片段转基因进行了研究.对147KB的BAC大段进行提取、酶切、纯化处理,得到具有70KB 5端侧翼序列,35KB3端侧翼序列的完整人乳铁蛋白序列.通过显微注射,得到11只阳性人乳铁蛋白转基因小鼠.其中五只母鼠Western blotting检测呈阳性.经放射性免疫测定,重组人乳铁蛋白(rhLF)的表达量在400mg/l至7.8g/l之间.对所获得的rhLF的糖基化程度的研究表明,rhLF和hLF经非减性(non-reducing)变性缓冲液变性后,Western杂交所显示的带型有显著差异(P<0.01).经N-glycosidase F去糖基化后,rhLF和hLF得到了大小一致的带型.这表明,rhLF和hLF在糖基化程度上有着明显差异.这种差异有可能导致rhLF和hLF在某些功能上的差异,这是在通过转基因手段大规模生产rhLF时应考虑到的方面.该研究的最终目的在于,把小鼠作为下一步实验的模式动物,为在大家畜上进行人乳铁蛋白转基因工作打基础.该实验的结果表明,BAC大片段用于转基因动物的研究是完全可行的;人乳铁蛋白BAC大片段转基因小鼠可获得较高表达量的重组人乳铁蛋白,该大片段可用地下一步大家畜的转基因研究.
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