本研究以加工番茄品种“双丰87-5”作为试验材料,克隆了番茄硫氧还蛋白Trxf1基因,对基因在真核和原核方面进行了表达,进一步对番茄硫氧还蛋白Trxf1基因进行实时荧光定量分析,研究结果如下:1.本研究克隆了番茄Trxf1基因,对该基因编码的蛋白序列进行了氨基酸同源性和进化树分析,番茄Trxf1与同为茄科茄属的马铃薯的同源性最高,与模式植物拟南芥的同源性最低;系统进化树显示,番茄Trxf1基因与马铃薯Trxf1基因的亲缘关系最近,与拟南芥等十字花科植物亲缘关系最远。2.利用克隆的Trxf1基因的编码区以及真核表达载体p BI121,成功构建了植物表达载体p BI121-Trxf1,采用农杆菌介导法转化番茄,提取植物DNA,经PCR、RT-PCR分析鉴定,结果表明,植物表达载体已成功整合到番茄基因组中。3.利用克隆的Trxf1基因的编码区成功构建原核表达载体p ET32a-Trxf1。将重组质粒转化大肠杆菌Transetta(DE3)宿主菌,经IPTG诱导,获得相对分子量为25k D的融合蛋白,通过亲和层析纯化可溶蛋白并获得Trxf1融合蛋白。用抗His标签的单抗对纯化蛋白进行Western blot鉴定,证明纯化的融合蛋白是带有His标签的Trxf1蛋白。用可溶性融合蛋白p ET32a-Trxf1免疫新西兰大白兔制备了Trxf1蛋白多克隆抗体Trxf1-KLH,ELISA测定抗体效价为1:6400,Western Blot检测抗体特异性,证实Trxf1蛋白的多克隆抗体已制备成功.4.利用实时荧光定量PCR对盐胁迫下番茄硫氧还蛋白基因Trxf1的时空表达分析,该基因在番茄不同组织中均有表达,且同一时期在叶片中的表达量最高;而在茎和叶器官中,盐胁迫显著下调了该基因的表达。外源硒对盐胁迫下番茄Trxf1及硫氧还蛋白系统相关基因表达的影响研究试验中,Na Cl胁迫处理下调了加工番茄幼苗叶片Fd/Trx系统各基因的m RNA转录表达,而施用外源硒显著上调了Na Cl胁迫处理期间加工番茄幼苗叶片各基因的m RNA转录表达;Na Cl胁迫处理上调了加工番茄幼苗叶片NTS系统各基因的m RNA转录表达,而施用外源硒显著下调了Na Cl胁迫处理期间各基因的m RNA转录表达。