重组人EPO细胞培养及纯化工艺优化

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重组人促红素(rhEPO)是利用含重组人促红素cDNA质粒转染CHO-dhfr细胞,并使之表达的蛋白质。本文以原有的EPO培养纯化工艺为基础,通过改变维持期EPO培养工艺和DEAE离子层析工艺,进一步提高了该CHO细胞株的EPO的表达量和纯化产量。  通过四组实验,CK:原培养工艺;组1、组2、组3:分别为在CHO细胞维持期的2、4、6天分别将细胞维持液更换为生长液,然后再更换为维持液。通过对四组细胞培养液葡萄糖、乳酸、氨、体外总活性的检测,以及对CHO细胞的显微镜观察,对细胞培养条件进行优化。结果显示,组1、组2、组3细胞代谢旺盛,生长状态、EPO表达量均优于CK组,且组2、组3细胞生长状态、表达量最优。  通过调节离子交换层析介质(DEAE)杂蛋白洗脱液BuffeB的pH值,以及改变DEAE离子层析纯化工艺实验,对蛋白纯化技术进行优化。结果显示,随着洗脱液pH的增加,蛋白收率逐渐提高,当pH为4.3左右时,蛋白收率、体外总活性达到最高。  应用高效液相、电泳纯度方法对纯化蛋白进行质量检测,检测结果显示,组1、组2、组3与CK相比,EPO蛋白质量均符合要求。进而确定了更好的CHO细胞培养工艺和EPO纯化工艺。  
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