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目的： 通过构建人类矮小同源盒基因（hSHOX）的慢病毒，转染Micromass培养的小鼠胚胎肢芽间充质细胞，观察软骨小结形成，并以Real time PCR检测软骨发育相关基因的表达，探讨hSHOX基因在软骨发育过程中的功能。 方法： 1.构建hSHOX基因慢病毒载体 将 hSHOX基因片段从pcDNA3.0载体上卸下，定向克隆连接入中间过渡载体pBS185，酶切获得含有启动子和多聚腺苷酸（PolyA）尾的目的基因片段，平端连接入慢病毒载体pNL-EGFP，获得hSHOX基因慢病毒载体，命名为pNL-EGFP-hSHOX。 2. pNL-EGFP-hSHOX和pNL-EGFP-mShox2慢病毒载体目的基因检测 将 pNL-EGFP-hSHOX、pNL-EGFP-mShox2以及空载体 pNL-EGFP转染293T细胞，荧光显微镜观察EGFP，Westernblot检测hSHOX基因和mShox2的表达。 3.慢病毒生产 将pNL-EGFP-hSHOX、pNL-EGFP-mShox2以及空载体pNL-EGFP与辅助质粒Helper、VSVG以一定比例共转染293T细胞，收集48h、72h病毒上清，经超滤浓缩后，测定病毒滴度，获得高滴度慢病毒颗粒。 4. Micromass培养小鼠E11.5肢芽间充质细胞 野生型C57/BL小鼠交配及C57/BL-mSho x2+/-雌鼠和雄鼠交配，取E11.5肢芽，分离间充质细胞进行Micromass培养，同时感染慢病毒，介导mShox2基因和hSHOX基因表达，10ul含105细胞种植在培养孔中央，培养5天后部分培养物经由Alcian Blue染色，观察软骨小结形成，其余培养物用于制备RNA并逆转录生成cDNA备用。 5. Real time PCR检测软骨发育相关基因 根据GeneBnk上软骨发育相关基因序列，设计特异性引物，以M icromass培养物cDNA为模板，进行Real-time PCR分析，检测软骨发育相关基因的表达,如Runx2、ColX、Col2a、Osteocalin、Ihh、Sox9基因等。 结果： 1.通过酶切、测序和Western blot鉴定，成功构建pNL-EGFP-hSHOX慢病毒载体； 2.获得高滴度hSHOX和mShox2慢病毒； 3. E11.5肢芽间充质细胞Micromass培养，mShox2基因敲除组软骨小结数较野生型组减少69％，具有显著差异（p<0.01）； 4.野生型E11.5肢芽间充质细胞Micromass培养，hSHOX基因和mShox2基因过表达软骨小结数分别增加1.5和1.8倍，具有显著差异（p<0.01）； 5. mShox2基因敲除小鼠E11.5肢芽间充质细胞Micromass培养，hSHOX基因和mShox2基因过表达能挽救软骨小结形成，数量分别增加3.5倍和3.9倍，具有显著差异（p<0.01）； 6. hSHOX和mShox2基因能够上调Runx2和ColX基因表达。Runx2相对表达量为12.1，ColX基因相对表达量为2，P<0.01，差异显著。 结论： 1. mShox2基因敲除小鼠肢芽软骨小结形成数减少，hSHOX基因能够挽救mShox2基因缺陷小鼠肢芽软骨小结形成; 2.在软骨小结形成过程中，hSHOX基因可上调Runx2ColX表达，表明hSHOX参与软骨细胞分化肥大的过程; 3.在软骨小结形成过程中，hSHOX基因功能与mShox2基因相似。