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鉴于我国有机磷和氨基甲酸酯农药的大量应用,蔬果中农药残留超标不容忽视。为了满足我国农产品现场和快速检测的需要,选取应用广泛、具有广谱杀虫效果和具有代表性的氨基甲酸酯类农药—多菌灵作为研究对象,根据酶联免疫分析的原理,试图建立快速、低成本、适宜于现场检测的多菌灵残留的酶联免疫快速检测技术,为进一步研制ELISA试剂盒及其工艺流程定型提供基础,也将为蔬果中农药残留的快速、现场检测和监控提供技术支撑。 多菌灵,通用名carbendazim,分子式:C9H9N3O2,化学名称O-甲基-N-2-苯并咪唑氨基甲酸酯（Methyl 3H-benzoimidazol-2-ylaminoformate）,与苯菌灵等具有相似的特异结构—苯并咪唑,与托布津、甲基托布津的代谢物结构相同。本研究设计了两条多菌灵半抗原的合成路线。其一,活化苯并咪唑环上的亚氨基,使之带上可以利用的羟基,合成半抗原—1—氧羰乙基丙酸—2—苯并咪唑氨基甲酸甲酯,多菌灵中的苯并咪唑环和氨基甲酸甲酯部分均被保留;其二,多菌灵原药在碱性条件下水解,生成2—氨基苯并咪唑氨基甲酸甲酯,再经琥珀酰化,得到半抗原—2—琥珀酰苯并咪唑。合成的两种半抗原经核磁共振和红外鉴定,证明合成成功。分别采用混合酸酐法、活性酯法使两种半抗原与蛋白质偶联制备了免疫原MBC-BSA和包被原MBC-OVA,偶联比均在3-35:1之间,符合小分子免疫的要求。经过免疫得到了抗血清,但是第一种免疫原的抗血清效价较低,不满足ELISA方法的要求。而第二种免疫原制备的多克隆抗体,效价在64000以上,同时除了与苯菌灵具有很高的交叉率、与噻苯达唑交叉率达到8%外,与托布津、甲基托布津等其它农药的交叉率均小于2%,符合ELISA分析技术建立对抗血清效价的要求,并用辛酸—硫酸铵盐析法对抗血清进行纯化。 本研究从包被条件与方法选择、抗体（抗血清）工作浓度优化和基质条件优化（盐浓度、pH值和样品溶剂）等方面初步得到间接ELISA分析的最佳工作条件,并在优化条件下建立多菌灵检测的间接ELISA法,抑制率与多菌灵的浓度对数值呈显著的线性关系,符合回归方程Y=11.832Ln（x）+57.366,回归系数R2=0.9989**,测定范围0.05ng/L-15ng/L,最低检测限0.05ng/mL,在10%的甲醇提取中的添加回收率平均为109%,变异系数6.2—16%,初步鉴定满足多菌灵的实际检测需求。 采用多菌灵间接ELISA法对结构类似物进行交叉反应试验。当多菌灵对抗体抗原反应的抑制率为50%时,所需多菌灵的浓度为4.0ng/g,苯菌灵的浓度为4.0ng/g,噻苯达唑浓度为30ng/g,交叉反应率为8%,甲基托布津、托布津浓度均大于200ng/g,交叉反应率为小于2%,2—氨基苯并咪唑浓度大于500ng/g,交叉反应率小于0.8%。此法可以用于苯菌灵及其代谢物多菌灵的检测,但是如何区分苯菌灵和多菌灵残留尚需进一步研究。 以建立的ELISA检测方法对来自土壤和水中的添加样品进行回收实验,并与常规的HPLC分析进行比较实验,间接ELISA法测定土壤中多菌灵的添加回收率土壤中回收率为88.5—109%,变异系数4.06—8.65%,河水中的回收率为76.5—99.4%,变异系数3.21—5.85%,纯水中变异系数6.2—16%,平均回收率109%。 综合分析,所建立的多菌灵间接ELISA法,可适用于现场快速检测,成本和简便性等方面较传统的仪器分析具有明显的优势。