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目的本研究主要通过构建miR-27a模拟物和抑制物,观察miR-27a对黑色素瘤WM239细胞增殖和耐药的影响,并初步探讨其机制。方法将mi R-27a模拟物、抑制物及其阴性对照转染WM239细胞:荧光显微镜观察转染效率,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测miRNA-27a的相对表达水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测WM239细胞增殖,平板克隆试验检测细胞克隆能力,流式细胞仪检测WM239细胞凋亡和细胞周期,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测抑癌基因p53、细胞周期基因cyclin D1、耐药基因MDR1、侵袭转移相关基因MMP2及MMP9、mi R-27a靶基因Sp1、ZBTB10及E2F7的表达变化,WB检测增殖相关分子细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、caspase-3和耐药蛋白P糖蛋白(P-gp)的表达变化。结果细胞转染效率为80%~90%。转染miR-27a模拟物后,细胞内miR-27a表达量明显上升(2-??CT值为26.98±0.01,F=6078713.38,P<0.05);转染miR-27a抑制物后,细胞中mi R-27a的表达量下降(2-??CT值为0.96±0.02),差异无统计学意义。转染miR-27a模拟物后,细胞增殖受到明显抑制,与正常对照组相比差异具有统计学意义(F=129.56,P<0.05)。miR-27a模拟物组G0-G1期的细胞比例升高(F=30.33,P<0.05),S期和G2-M期细胞比例减少(F=14.98,P<0.05;F=3.66,P<0.05);模拟物组细胞凋亡率与正常对照组相比明显增加(F=530.90,P<0.01);而抑制物组对细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡无明显作用,差异无统计学意义。转染miR-27a模拟物后能明显抑制细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达,促进抑癌基因p53表达,并激活凋亡相关分子天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3);通过检测相关信号通路分子的表达变化,发现细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)的磷酸化水平下降。转染miR-27a模拟物后能明显增强WM239细胞对紫杉醇的药物敏感性,增强紫杉醇的对WM239细胞的杀伤作用,这与miR-27a抑制耐药基因MDR1及其蛋白产物P-gp的表达有关。mi R-27a能抑制细胞侵袭转移相关分子MMP2和MMP9的表达。通过RT-PCR检测发现,转染miR-27a模拟物后其靶基因特异性蛋白1(Sp1)表达下降,而锌指和BTB结构域蛋白10(ZBTB10)表达上升,E2F7的表达无明显变化。结论1.mi R-27a能抑制黑色素瘤细胞WM239增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期于G0-G1期,其机制可能与cyclinD1表达下降、p53表达上调、caspase-3的活化和ERK1/2的磷酸化被抑制相关;2.mi R-27a能抑制侵袭转移相关分子MMP2、MMP9的表达,发挥抑癌作用;3.miR-27a能增加WM239细胞对紫杉醇的药物敏感性,其机制可能与miR-27a通过ZBTB10-Sp间接调节MDR1/P-gp的表达相关。