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目的建立金黄色葡萄球菌(金葡菌,Staphylococcus aureus, SA)血流感染的小鼠模型以及探讨NLRP3炎性小体在金葡菌血流感染小鼠免疫反应中的作用机制。方法(1)金黄色葡萄菌标准菌株ATCC29213于LB培养液中37℃摇菌过夜,然后重悬于无菌PBS中,麦氏比浊法确定1.5麦氏相当于4.5×108CFU/mL菌液浓度作为最适感染浓度。(2)对C57BL/6小鼠经腹腔麻醉后分别经尾静脉注射等体积的金葡菌菌液,感染后24h及48h安乐死处死小鼠,对照组为正常未感染小鼠于实验开始时即安乐死处死小鼠并检测相关指标。(3)取上述各组小鼠血液及组织匀浆(肝、肺、肾)于血培养皿中经24-48 h细菌培养后检测其细菌计数。(4) ELISA法检测上述各组小鼠血清及组织匀浆中细胞因子(IL-1β和IL-18)含量。(5) QRT-PCR及Western Blotting法分别检测上述各组小鼠组织匀浆中NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA及蛋白的含量。(6)HE染色定性观察各组小鼠组织中的炎性改变以及经免疫组化后半定量观察组织中各炎性小体蛋白表达情况。结果(1)血流感染组中,血液及组织匀浆培养的细菌在感染24 h及48 h后计数显著升高,且48h组明显高于24h组(p＜0.05)。(2)组织切片HE染色后观察到感染组小鼠的肝、肺、肾组织中均有炎性细胞浸润及组织脓肿和坏死并随时间而加重,而对照组则基本正常,无炎性细胞浸润。(3)IL-1β和IL-18细胞因子水平在血流感染组中显著升高(P＜0.05),且与24h组相比,48h组血清及肝、肺匀浆中的IL-1β,血清中的IL-18显著降低,而肾匀浆中IL-1β和肺匀浆中IL-18显著升高(p＜0.05)。(4)与对照组相比,血流感染组3种组织匀浆中ASC和caspase-1 mRNA表达在感染后48h显著增加,而肝和肺匀浆中的NLRP3 mRNA表达在感染后24h就明显增加(p<0.05)。(5)血流感染组NLRP3,ASC,pro-casepase-1和caspase-1蛋白水平显著升高(p<0.05)。与感染后24h相比,感染后48h肺、肾组织中ASC蛋白,肺、肝组织中pro-casepase-1、caspase-1 p20蛋白水平显著升高(p<0.05)。此外,同组中NLRP3和caspase-1蛋白在肝、肾组织中表达水平更高,而ASC在肺组织中表达水平更高。(6)免疫组化结果显示金葡菌诱导炎性细胞的招募以及NLRP3,ASC和caspase-1蛋白的阳性表达且随感染时间而增加；此外,与肺组织相比,肝和肾组织中表达的阳性蛋白更多。结论1.炎性小体(NLRP3,ASC,caspase-1)的激活在金黄色葡萄球菌血流感染的过程中起到重要的调节作用,最终以促进细胞因子IL-1β和IL-18的释放而发挥促炎作用。2. NLRP3, ASC,caspase-1炎性小体不仅与金葡菌血流感染密切相关,而且其表达水平与感染严重程度有关。3.炎性小体的激活在血流感染小鼠的不同组织中表达量不同,具有组织特异性。