目的:脑卒中是全球致死致残的主要原因之一,其中,缺血性脑卒中约占80%。它给患者的家庭和社会造成了极大的负担。然而,对缺血性脑卒中的治疗效果却不尽如人意,早期溶栓治疗是目前公认唯一有效的治疗方法,但时间窗仅有3～4.5h,使得大多数患者失去了接受最佳治疗的机会。微小RNA(micro RNAs,miRNA)是内源性表达的RNA分子,它能抑制m RNA翻译,在各种疾病的病理生理过程中起重要的调节作用。其中,MiR-19a-3p是mir R-17-92簇的重要组成元件,近年来的研究发现它与多种肿瘤的发病有关,包括肺癌、胃癌、乳腺癌、肝细胞癌等。此外,研究已发现miR-19a-3p在胶质瘤细胞中过表达,而且其表达水平与胶质瘤的恶性程度密切相关。还有研究报道miR-19a-3p能刺激胚胎皮质神经元的轴突生长。而且研究还发现miR-17-92簇在培养的缺血性神经祖细胞或缺血动物的脑室下区域中过表达,显著加速了细胞增殖,同时,抑制miR-17-92簇的组成成分(miR-18a和miR-19a-3p),细胞增殖减少,细胞死亡增强。因此,我们推测miR-19a-3p可能在缺血性脑卒中的发病机制中可能发挥调节作用,但是,当前相关的研究却很少。本实验通过建立大鼠缺血/再灌注模型和体外氧-葡萄糖剥夺培养的神经元,研究miR-19a-3p在缺血性脑卒中发病过程中的功能作用,并探讨其可能的调节机制,为寻找治疗该病的新靶点提供理论依据。方法:1.将新生大鼠海马组织中的神经元和星形胶质细胞进行分离和培养,然后,通过实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)检测正常情况下miR-19a-3p在这两种细胞的表达水平差异;之后,建立体外氧-葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)神经元模型和脑缺血-再灌注(ischemia/reperfusion,IR)大鼠模型,在离体和在体两种情况下,再次用q RT-PCR检测缺血缺氧时神经元内miR-19a-3p的表达变化。2.建立OGD模型和IR大鼠模型,用Western Blot检测缺血性脑卒中后神经元内糖代谢相关酶的表达变化,同时用比色法对比神经元的葡萄糖摄取量和乳酸产量情况,之后,用TUNEL染色检测神经元的凋亡情况,并用Western Blot检测凋亡相关蛋白的表达变化;最后,通过将OGD模型转染miR-19a-3p mimic或miR-19a-3p inhibitor,检测miR-19a-3p对缺血性脑卒中后神经元糖代谢及凋亡的影响。3.通过Target Scan软件进行生物信息学分析,再结合糖代谢及缺血性脑卒中发病的相关机制推测,寻找miR-19a-3p的可能靶基因,然后,用双荧光素酶实验进行靶向验证;用q RT-PCR和Western Blot分别检测OGD模型中神经元内靶基因的m RNA和蛋白质表达情况;最后,将靶基因的siRNA单独或和miR-19a-3p inhibitor一起转染神经元,评估神经元的糖代谢和凋亡情况,验证miR-19a-3p与靶基因的相互作用。结果:1.正常情况下,miR-19a-3p在星形胶质细胞的表达水平比神经元高;当缺血缺氧时,无论是离体还是在体神经元内miR-19a-3p的表达水平上调。2.在IR/OGD后,糖代谢相关酶表达水平下降,神经元的葡萄糖摄取量和乳酸产量都减少,糖代谢水平降低,凋亡相关蛋白表达增加,受损神经元发生凋亡增加;转染miR-19a-3p mimic的OGD模型神经元内糖代谢水平下降,凋亡细胞增加,而转染miR-19a-3p inhibitor者结果相反。3.生物信息学分析和双荧光素酶实验的结果推测ADIPOR2可能是miR-19a-3p作用的靶基因;在缺血缺氧环境下,神经元内ADIPOR2的m RNA和蛋白质的表达都降低;miR-19a-3p inhibitor可以逆转上述变化,改善糖代谢水平,减少细胞凋亡。结论:1.miR-19a-3p在缺血性脑卒中的发生发展过程中可能发挥调节作用。2.miR-19a-3p能够降低神经元的糖代谢能力,增加细胞的凋亡,说明miR-19a-3p能够加剧缺血性脑卒中后的神经损伤。3.miR-19a-3p可能是通过调节ADIPOR2对缺血性脑卒中后缺血区域脑组织的神经元产生损伤作用,miR-19a-3p抑制剂能够改善缺血缺氧时神经元的糖代谢及凋亡情况,有望成为缺血性脑卒中的新型治疗药物。