论文部分内容阅读
特发性肺纤维化(IPF)为发生于肺脏的慢性、进行性、纤维化性、原因不明的间质性肺炎。缺乏有效的治疗手段,预后差。目前西医治疗以激素、吡非尼酮、尼达尼布等为主,均有一定效果但不能有效控制逆转病情进展,且存在不良反应,而中医药治疗IPF有一定优势。肺纤方为姜良铎教授治疗IPF经验方,本研究分别从临床观察和动物实验两部分探讨肺纤方治疗IPF临床效果和作用机制。目的临床观察部分通过观察肺纤方加减、肺纤方加减联合激素、肺纤方加减联合吡非尼酮三种方法治疗肺肾亏虚、痰瘀阻络证IPF患者的临床效果,以期探讨肺纤方的临床疗效及治疗IPF相对较优的方法。动物实验部分通过博来霉素建立大鼠肺纤维化模型,予肺纤方进行干预,通过观察其对肺组织病理、Wnt/β-catenin信号通路及上皮间质转化(EMT)影响方面,探讨肺纤方干预肺纤维化的作用机制。方法临床观察:预先制定《特发性肺纤维化肺肾亏虚、痰瘀阻络证患者治疗前后临床观察表》,将符合纳入标准的49例IPF患者按就诊时是否服用激素或吡非尼酮分为三组,进行中药肺纤方疗效观察,不再人为进行随机或盲法对照,这是中医医院真实的中医药治疗肺纤维化的方法,大部分患者是西医院诊断已经采取西药治疗的患者。已服用激素者,继续激素治疗并按疗程给予减量,同时给予口服肺纤方加减,称为肺纤方+激素组,共17例;已服用吡非尼酮者,继续吡非尼酮治疗,同时给予口服肺纤方加减,称为肺纤方+吡非尼酮组,共14例;均未服用激素或吡非尼酮者,只给予肺纤方加减治疗,称为肺纤方组,共18例。观察治疗疗程6个月。治疗前记录患者基本资料,包括姓名、性别、年龄、病程、吸烟史、基础疾病、病情程度情况。治疗前后详细记录患者主要症状、主要体征、肺功能、胸部HRCT、mMRC呼吸困难指数积分情况,观察对比三组治疗效果。动物实验:选取120只Wistar大鼠(雄性,体重200±20g),常规饲养一周后,按随机数字表分为6组,对照组、模型组、泼尼松组、肺纤方高、中、低剂量组,每组20只。博来霉素3mg/kg气管滴注诱导肺纤维化大鼠模型,造模次日常规灌胃相应药物进行干预,每日一次。造模后第14、28天分两批处理动物,观察记录各组大鼠一般状态;HE染色、Masson染色观察肺组织肺泡炎和肺纤维化程度;Western blot检测肺组织中 wnt3a、β-catenin、WIF1、GSK-3β、p-GSK-3β、α-SMA、Collagen Ⅰ及E-cadherin蛋白表达;RT-PCR 检测肺组织中 wnt3a、β-catenin、WIF1、LRP、α-SMA 及 E-cadherin的mRNA表达。结果1 临床观察1.1患者基本资料三组共纳入49例患者,3例脱落,最终纳入分析46例。三组治疗前在性别、年龄、病程、HRCT病情程度上均无统计学差异(p>0.05),有可比性。1.2综合疗效三组综合疗效经Kruskal-Wallis H检验,无统计学差异(p>0.05),提示三组治疗IPF综合疗效无明显差别。其中,肺纤方组综合疗效有效率为68.75%,肺纤方+激素组为56.25%,肺纤方+吡非尼酮组为78.57%。1.3主要症状改善喘憋、咳嗽、咯痰方面,三组均可减轻其症状(p<0.05或p<0.01);改善气短方面,肺纤方+吡非尼酮组效果较好(p<0.05)。1.4主要体征改善Velcro啰音、紫绀方面,三组均可减轻其体征(p<0.05或p<0.01);而杵状指三组均未见明显改善(p>0.05)。1.5肺功能改善TLC%方面,肺纤方组效果较好(p<0.05);改善DLCO%方面,肺纤方+吡非尼酮组效果较好(p<0.05);而VC%三组均未见明显改善(p>0.05)。1.6 胸部 HRCT改善磨玻璃影方面,三组均可减轻其征象(p<0.01);改善网格影方面,肺纤方+吡非尼酮组效果较好(p<0.05);而蜂窝影三组均未见明显改善(p>0.05)。1.7mMRC呼吸困难指数评分改善mMRC呼吸困难指数方面,肺纤方组、肺纤方+吡非尼酮组效果较好(p<0.05或p<0.01);而肺纤方+激素组未见明显改善(p>0.05)。2动物实验2.1大鼠肺组织病理学观察HE染色:第14、28天,与对照组相比,模型组肺泡炎评分显著升高(p<0.01),第14天时更为明显;与模型组相比,各治疗组肺泡炎均减轻,泼尼松组、肺纤方高、中剂量组明显减轻(p<0.05或P<0.01)。Masson染色:第14、28天,与对照组相比,模型组肺纤维化评分显著升高(p<0.01),第28天时更为明显;与模型组相比,各治疗组肺纤维化程度均减轻,肺纤方中剂量组明显减轻(p<0.05 或p<0.01)。2.2肺纤方对肺纤维化大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响蛋白表达:第14、28天,与对照组相比,模型组大鼠肺组织中wnt3a、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达增加(p<0.05或p<0.01),GSK-3β蛋白表达降低(p<0.05);与模型组相比,肺纤方中剂量组下调wnt3a、β-catenin蛋白表达,上调WIF1、GSK-3β蛋白表达最明显(p<0.05或p<0.01)。基因表达:第14、28天,与对照组相比,模型组大鼠肺组织中wnt3a、β-catenin、LRP的mRNA表达增加(p<0.05或p<0.01),WIF1的mRNA表达降低(p<0.05或p<0.01);与模型组相比,肺纤方高、中剂量组下调wnt3a、β-catenin、LRP的mRNA表达和上调WIF1的mRNA表达最明显(p<0.05或P<0.01)。2.3肺纤方对肺纤维化大鼠EMT的影响蛋白表达:第14、28天,与对照组相比,模型组大鼠肺组织中α-SMA、Collagen Ⅰ的蛋白表达增加(p<0.01),E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05或p<0.01);与模型组相比,肺纤方高剂量组下调α-SMA、Collagen Ⅰ蛋白表达,肺纤方中剂量组上调E-cadherin 蛋白表达最明显(p<0.05 或p<0.01)。基因表达:第14、28天,与对照组相比,模型组大鼠肺组织中α-SMA的mRNA表达增加(p<0.01),第14天E-cadherin的mRNA表达较对照组有下降趋势,但无统计学差异(p>0.05),第28天E-cadherin的mRNA表达较对照组降低(p<0.05);与模型组相比,第14、28天肺纤方高剂量组下调α-SMA和上调E-cadherin的mRNA表达最明显(p<0.05 或p<0.01)。结论1 临床观察1.1肺纤方组、肺纤方+激素组、肺纤方+吡非尼酮组均可提高IPF患者的临床疗效,以肺纤方+吡非尼酮组效果最好,但也显示肺纤方是治疗肺肾亏虚、痰瘀阻络证IPF患者的有效方剂。1.2改善主要症状、体征方面,三组疗效相当;改善患者肺功能方面,肺纤方+吡非尼酮组效果较优;改善患者胸部影像方面,肺纤方+激素组、肺纤方+吡非尼酮组效果较优;改善患者mMRC呼吸困难指数方面,肺纤方组、肺纤方+吡非尼酮组效果较优。2动物实验2.1肺纤方可改善博来霉素诱导的肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化。肺纤方高、中剂量组尤为显著,且彼此差异不明显,说明肺纤方剂量过大并不明显增强效果,故肺纤方中剂量最为理想。2.2肺纤方可通过调控Wnt/β-catenin信号通路和EMT中相关分子的蛋白及mRNA表达干预肺纤维化。抑制Wnt/β-catenin信号通路活化及EMT可能是肺纤方干预大鼠肺纤维化的作用机制之一。