刺参(Stichopus japonicus)生长于我国北部沿海,是目前已知营养价值最高的一种可食用海参。刺参体壁蛋白中70%以上为胶原蛋白,因此胶原蛋白结构在一定程度上决定着刺参体壁的独特物性,对其进行深入研究,能揭示刺参体壁的特性。本研究采用“水洗-盐洗-水洗-碱洗-酸提-加胃蛋白酶酸”这一提新的提取方法,能同时从刺参体壁中分离酶促溶性胶原蛋白和酸溶性胶原蛋白,为刺参体壁胶原蛋白的进一步研究提供了参考;对刺参体壁胶原蛋白中羟脯氨酸含量的测定方法进行了优化,并测定了刺参体壁酶促溶性胶原蛋白和酸溶性胶原蛋白的羟脯氨酸含量;采用紫外-可见光谱和红外光谱对酶促溶性胶原蛋白进行鉴定,并采用半制备阴离子交换色谱和TSK-G3000SW凝胶色谱对其进行纯化;采用SDS-PAGE电泳对纯化后的酶促溶性胶原蛋白的高级结构进行分析。实验结果表明,本研究所采用的提取方法能同时得到酶促溶性胶原蛋白和酸溶性胶原蛋白,得率分别为12.06%和1.84%。测定刺参体壁胶原蛋白中羟脯氨酸含量的最佳水解条件为温度120℃、时间6h,此条件下所测得酶促溶性胶原蛋白和酸溶性胶原蛋白的羟脯氨酸含量分别为8.29%和8.16%。酶促溶性胶原蛋白的紫外-可见光谱最大吸收峰位于230nm,而280nm无明显的吸收峰,其的红外光谱具有胶原的特征性吸收。通过半制备阴离子交换色谱和TSK-GELG3000SW凝胶色谱纯化后,所得到的酶促溶性胶原蛋白具有很高的纯度。SDS-PAGE电泳结果显示,本研究纯化所得的刺参体壁酶促溶性胶原蛋白主要由胶原α链组成,其高级结构为(α1)2α2。