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目的：本研究旨在探讨伊马替尼(imatinib)、尼洛替尼(nilotinib)联合汉防己甲素(tetrandrine,Tet)逆转K562／A02细胞耐药与诱导凋亡的相关性及其机制,为白血病的治疗提供一定的理论基础。
方法：应用MTT法选择伊马替尼、尼洛替尼和汉防己甲素的逆转浓度,并且计算伊马替尼、尼洛替尼和汉防己甲素干预K562／A02细胞后的柔红霉素(daunombicin,DNR)的半数抑制浓度(IC50):应用流式细胞术(flow cytometery,FCM)检测K562／A02细胞凋亡率；应用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcript polymerase chain reaction,RT-PCR)检测bax和survivin mRNA的表达及Western blotting分析Bax和Survivin蛋白的表达情况。
结果：1、0.06251μmol／L伊马替尼、5nmol／L尼洛替尼和1.0μmol／L汉防己甲素单独作用于K562／A02细胞48小时后,DNR对K562／A02细胞的IC50分别为(6.81±0.15)mg／L、(5.714-0.72)mg／L和(6.52±O.43)mg／L,逆转倍数分别为2.10±0.07、2.50±0.13和2.19±0.09。而伊马替尼和尼洛替尼分别联合汉防己甲素处理细胞48小时后,DNR对K562／A02细胞的IC50降为(2.91±0.23)mg／L和(3.12±0.13)mg／L,逆转倍数分别为4.93±0.11和4.58±0.17,与单药组相比差异有统计学意义(P<0.05)。
2、0.0625μmol／L伊马替尼、5nmol／L尼洛替尼和1.0μmol／L汉防己甲素单独作用于K562／A02细胞48小时后,均能增加DNR诱导K562／A02细胞凋亡,伊马替尼、尼洛替尼分别和汉防己甲素联合作用时细胞凋亡率较单药组增高,差异有统计学意义(P<0.05),并且伊马替尼和汉防己甲素联合组细胞凋亡率高于尼洛替尼和汉防己甲素联合组,差异有统计学意义(P<0.05)。
3、(1)单用0.0625μmol／L伊马替尼、5nmol／L尼洛替尼和1.0μmol／L汉防己甲素48小时后,K562／A02细胞中bax mRNA灰度值分别为0.33±0.01、0.39±0.02、0.48±0.04,当伊马替尼、尼洛替尼分别和汉防己甲素联合作用时K562／A02细胞中bax mRNA灰度值分别为0.91±0.04和0.78±0.05,与单药组相比差异有统计学意义(P<0.05),且尼洛替尼联合汉防己甲素组与伊马替尼联合汉防己甲素组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。单用0.0625μmol／L伊马替尼、5nmol／L尼洛替尼和1.0μmol／L汉防己甲素48小时后,K562／A02细胞中Bax蛋白表达水平分别为0.61±0.01、0.83±0.02和1.02±0.02,伊马替尼、尼洛替尼分别和汉防己甲素联合作用时K562／A02细胞中Bax蛋白表达水平分别为2.04±0.05和1.72±0.04,与单药组相比差异有统计学意义(P<0.05),且尼洛替尼联合汉防己甲素组与伊马替尼联合汉防己甲素组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)单用0.0625μmol／L伊马替尼、5nmol／L尼洛替尼和1.0μmol／L汉防己甲素48小时后,K562／A02细胞中survivin mRNA灰度值分别为0.68±0.03、0.59±0.02和0.51±0.01,当伊马替尼、尼洛替尼分别和汉防己甲素联合作用时K562／A02细胞中survivin mRNA灰度值分别为0.23±0.01和0.32±0.02,与单药组相比差异有统计学意义(P<0.05),且尼洛替尼联合汉防己甲素组与伊马替尼联合汉防己甲素组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。单用0.0625μmol／L伊马替尼、5nmol／L尼洛替尼和1.0μmol／L Tet48小时后,K562／A02细胞中Survivin蛋白表达水平分别为0.79±0.06、0.70±0.04和0.58±0.02,当伊马替尼、尼洛替尼分别和汉防己甲素联合作用时K562／A02细胞中Survivin蛋白表达水平分别为0.24±0.01和0.38±0.01,与单药组相比差异有统计学意义(P<0.05),且尼洛替尼联合汉防己甲素组与伊马替尼联合汉防己甲素组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论：1、K562／A02细胞对DNR耐药,单独应用伊马替尼、尼洛替尼和汉防己甲素均可部分逆转K562／A02细胞对DNR的耐药,并可增加DNR对K562／A02细胞的凋亡率,机制可能与上调bax mRNA及其蛋白的表达和下调survivin mRNA及其蛋白的表达有关。2、酪氨酸激酶抑制剂联合汉防己甲素具有增强逆转耐药作用。