感染Ad-EphrinA1-Caspase3的T淋巴细胞对体外乳腺癌细胞的靶向杀伤作用

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研究背景:全球范围内,随着生活水平的不断提高,影响人类健康的疾病逐渐转为以慢性非传染性疾病为主,其中恶性肿瘤为最常见的疾病之一。在中国,乳腺癌位列女性癌症发病率第一位,成了当代城市女性健康和生命的首要威胁。乳腺癌的发生、发展与转移和体内信号通路的异常及癌基因的相关表达产物有关,因而目前乳腺癌的分子靶向治疗成为了研究热点。细胞凋亡通路障碍是恶性肿瘤的最大特征,因此探索乳腺癌细胞凋亡信号通路失调的分子机制,诱导其重新进入正常凋亡周期可能是治愈乳腺癌的根本途径。Eph A2受体为受体酪氨酸激酶家族成员之一,主要配体为Ephrin A1。本课题组前期研究发现酪氨酸激酶受体Eph A2在乳腺癌细胞高表达,有可能成为乳腺癌治疗的新靶点。凋亡效应分子Caspase3位于凋亡通路枢纽,Caspase3的活化能引起细胞凋亡。目的:将成功感染重组Ad-Ephrin A1-Caspase3的T淋巴细胞作用于体外的乳腺癌细胞,研究感染Ad-Ephrin A1-Caspase3的T淋巴细胞对体外乳腺癌细胞是否有靶向杀伤作用,为乳腺癌的分子靶向治疗提供新思路。方法:将课题组前期实验已验证成功感染重组Ad-Ephrin A1-Caspase3的T淋巴细胞作用于人正常乳腺细胞和乳腺癌细胞(标本已经过临床病理证实)。采用MTT法检测感染重组Ad-Ephrin A1-Caspase3的T淋巴细胞上清对体外Eph A2阳性表达的乳腺癌细胞增殖的影响。采用流式细胞仪检测感染重组Ad-Ephrin A1-Caspase3的T淋巴细胞上清对体外乳腺癌细胞凋亡的影响。采用抗体中和实验检测感染重组Ad-Ephrin A1-Caspase3的T淋巴细胞上清中Ephrin A1-Caspase3对乳腺癌细胞杀伤作用的特异性。结果:乳腺癌细胞呈贴壁生长,有梭型、多边形等多种形状,聚集成巢状,细胞中可见Eph A2受体呈强阳性表达;正常乳腺细胞也呈贴壁生长,圆形且透亮,几乎没有Eph A2受体及Ephrin A1配体的表达。MTT法检测感染重组Ad-Ephrin A1-Caspase3的T淋巴细胞上清对体外乳腺癌细胞增殖表现出强烈的抑制作用,生长抑制率达42.3%。用流式细胞仪检测培养72h后稀释倍数为1、2、4、8、16上清对应的凋亡率分别为36%、24%、18%、8%、7%,显著高于对照组凋亡率3.5%(P<0.05)。抗Ephrin A1的血清中和抗体能有效地减弱感染重组Ad-Ephrin A1-Caspase3的T细胞对Eph A2阳性表达的乳腺癌细胞的杀伤作用。结论:感染Ad-Ephrin A1-Caspase3的T淋巴细胞对体外乳腺癌细胞能产生靶向杀伤作用。
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