目的:本研究旨在调查湖北两地水产品的养殖、销售和餐饮加工等流通环节中副溶血性弧菌污染状况,了解副溶血性弧菌分离株的抗生素耐药性和分子分型方面的特征。同时,通过基因序列的同源性分析和基因定位研究,分析环境中存在的耐药基因与副溶血性弧菌分离株耐药性的相关性,探讨相关抗生素耐药性的来源途径及其在“养殖-销售-餐桌”整个食物链过程中的传播机制,以便更有效地采取有针对性的措施来避免耐药基因通过食物链的广泛传播扩散,从而达到遏制细菌耐药性蔓延和保障公共卫生安全的目的。方案:1.采样点的选择选择2个地域上不相邻的淡水性水产品养殖业发达地区,在每个地区分别选择具有代表性的2~3个养殖场、3个销售场所、3个餐饮单位和1家综合性医院。2.采样安排(a)在养殖场采集水产品、环境水体(与相应水产品直接接触的)和水底沉积物(相应水产品所生活水体中的)3类样品。(b)在销售场所和餐饮单位采集水产品、环境水体(与相应水产品直接接触的)2类样品。(c)在哨点医院收集腹泻病人副溶血性弧菌阳性菌株样本。3.副溶血性弧菌的分离鉴定通过3%氯化钠碱性蛋白胨水增菌,科玛嘉弧菌显色平板分离培养,通过VITEK全自动微生物鉴定系统对可疑菌株进行生化鉴定。4.脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis)参照美国CDC推荐的霍乱弧菌脉冲场电泳标准方法,用内切酶Not酶切对致病性弧菌菌株进行PFGE分型,到电泳图谱,利用国家食源性疾病分子溯源网络进行分子溯源分析。5.致病性弧菌的耐药性分析采用肉汤稀释法对所分离到副溶血性弧菌进行抗生素耐药性分析。根据临床上推荐的弧菌类耐药分析推荐抗生素选择苯唑西林、环丙沙星、头孢西丁、头孢噻肟、克林霉素、氯霉素、庆大霉素、红霉素、万古霉素、萘啶酸、四环素和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑。耐药性判断标准参考国家食品安全风险评估项目中对副溶血性弧菌的耐药监测的要求。结果:1.在所采集的645份样品中,共89份样品检出了副溶血性弧菌,检出阳性率为13.8%。在哨点医院腹泻病人中分离出副溶血性弧菌阳性菌株14份。在进行毒力基因检测发现在外环境中未外发现TLH阳性菌株,海产品中检出一株TDH阳性菌株,医院菌株TDH均为阳性。2.在对不同来源副溶血性弧菌进行脉冲场凝胶电泳PFGE分型,发现PFGE图谱差异较大,其相似区间为(60.6%-100%),主要集中在4个基因簇间分布,并有一定的亲缘关系。3.耐药性分析中发现大量阳性菌株属于多重耐药菌,医院收集到的阳性菌株的耐药率高于外环境中收集到的菌株。结论:1.外环境水产品中TDH、TRH两种毒力基因检出率远低于医院中分离到的菌株。2.聚类分析发现海水产品、淡水产品阳性菌株其亲缘关系主要集中在P2基因簇间。3.水产品中样本检出的副溶血性弧菌主要耐万古霉素和红霉素。