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稻瘟病作为水稻三大病害之一,是严重影响水稻生产的重要病害。目前研究表明,植物中的miRNA可以调控植物的生长发育,生物和非生物胁迫,以及抗性反应。但是其中针对miRNA调节水稻和稻瘟病菌互作的研究报道很少,本实验室鉴定出了两个正调稻瘟病抗性的miRNA:miRNA398和miRNA 160,并且他们可能是通过抑制靶基因的转录来调控稻瘟病抗性。为了研究miRNA 160靶基因LOC_Os06g47150和miRNA398靶基因LOC_Os04g48410的生物学功能,验证靶基因LOC_Os06g47150与-niRNA160的关系、靶基因LOC_Os04g48410与miRNA398的关系,并进一步阐释miRNA398和miRNA 160的调控网络的研究做准备。本课题通过构建niRNA160靶基因LOC_Os06g47150和miRNA398靶基因LOC_Os04g48410过表达载体,过表达突变载体,以及RNAi载体,并遗传转化水稻获得了相应材料。本研究中,首先是构建miRNA 160靶基因LOC_Os06g47150和miRNA398靶基因LOC_Os04g48410过表达载体,通过注射本生烟观察这两个基因的亚细胞定位,发现靶基因LOC_Os04g48410主要在细胞膜上表达,而靶基因LOC_Os06g47150主要在细胞核中表达。其次是构建miRNA 160靶基因LOC_Os06g47150和miRNA398靶基因LOC_Os04g48410过表达突变载体,并通过农杆菌介导方法转化水稻,经潮霉素鉴定和PCR鉴定后,LOC_Os06g47150mutant得到了4株转基因水稻植株,LOC_Os04g48410 mutant得到24株转基因水稻植株。最后构建了miRNA 160靶基因LOC_Os06g47150和miRNA398靶基因LOC_Os04g48410 RNAi的载体。