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研究目的: 1.观察研究人fxyd6基因在正常胆管、先天性胆管囊肿及胆管癌中的差异性表达,检测该基因在胆管癌组织切片中的亚细胞表达定位。 2.检测膜离子通道同源蛋白FXYD家族成员2、4在大、小鼠肝外胆管中的表达情况。 3.观察研究FXYD2蛋白在人胆管癌中的表达情况。 4.探讨fxyd基因家族与胆管疾病间关系及新基因fxyd6及其家族的功能,旨在为揭示其在胆管上皮细胞生理和病理过程中的基本生物学作用奠定基础。 研究方法: 1.设计人fxyd6基因两对特异性引物,采用RT-PCR方法检测该基因在正常胆管、胆管囊肿及胆管癌新鲜组织中的差异性表达,采用IS-RT-PCR方法原位检测该基因在胆管癌石蜡组织切片中的亚细胞表达定位。 2.采用Western Blotting和immunofluorescence染色方法观察FXYD2、4同源蛋白在大、小鼠肝外胆管中的表达情况。 3.采用Western Blotting和immunofluorescence染色方法检测FXYD2蛋白在人正常胆管和胆管癌中的表达差异。 4.应用多媒体图象分析软件对上述结果进行半定量分析并比较它们在人正常胆管与胆管癌中的表达差异,统计学处理采用配对t检验、卡方检验,p<0.05有显著性差异。 研究结果: 1.RT-PCR检测结果表明人fxyd6基因在正常胆管、胆管囊肿、胆管癌中均存在表达;图象半定量平均IOD值分析结果显示该基因的表达量在正常胆管与高分化胆管癌之间存在明显差异(p<0.05),胆管囊肿与高分化胆管癌之间存在明显差异(p<0.05),在肿瘤中表达量增加;fxyd6基因的表