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miRNA的作用是通过同靶mRNA的3’端靶向结合降解或者是抑制其靶基因翻译,进而可以对靶基因的转录后进行调控。另mi RNA可识别相应的靶基因且不是单一映射关系,同时存有多个不同miRNA调控同一靶基因,而miRNA也可以调控多个不同的靶基因。我们前期预测发现斑马鱼中nup43是miR-203的靶基因,并且在三唑磷,化学名称O,O-二乙基-O-(1-苯基-l,2,4-三唑-3-基)硫代磷酸酯的胁迫下nup43的表达受miR-203的调控。在本实验中,课题组利用Microcosm Targets软件预测得出nup43为miR-203与miR-217共同调控靶基因,通过实验验证了这2个miRNAs分别与nup43之间的关系。我们评估了三唑磷暴露下斑马鱼中这2个mi RNAs的表达,研究2种miRNAs能否调控nup43的表达,结果发现随着三唑磷处理浓度的升高,斑马鱼中miR-203基因的表达量显著上调,斑马鱼中miR-217基因的表达量显著下调。mi RNA可作为环境化学物质或致癌基因得生物标记物。为了解释三唑磷处理后miRNA表达的变化,进一步验证生物信息学预测的结果。我们通过将nup43 3’-UTR中miR-203和miR-217结合位点分别敲除,成功构建了2个重组海肾荧光素酶载体,分别命名为pRL/S-K.O-203、pRL/S-K.O-217。通过双荧光素酶报告基因法验证了斑马鱼nup43 3’-UTR中存在miR-217的结合位点。我们通过对ZF4细胞转染miR-217 mimic后,检测细胞中nup43的表达量,发现nup43在mRNA水平及蛋白水平都显著下调,而转染miR-217 inhibitor后,nup43的mRNA水平及蛋白水平则显著上调,但对ZF4细胞转染miR-203 mimic后,其nup43表达量为上调,但转染miR-203 inhibitor后,其nup43表达量为显著下调。依上述可得,nup43是miR-203和miR-217的靶基因,在三唑磷暴露下miR-203与miR-217的变化表明其可以作为暴露于三唑磷环境的生物标志物。