斜纹夜蛾脂肪酸结合蛋白FABP2的表达、调节及功能研究

来源 :华南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kaffee0929
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脂肪酸是生物体内的必需成分,对细胞的结构和代谢起着重要的作用。脂肪酸是疏水性分子,通常需要与细胞内的蛋白结合形成可溶性的复合物,才能被转运至细胞不同部位发挥作用。脂肪酸结合蛋白(Fatty acid binding protein,FABP)是运转脂肪酸的一类重要蛋白。前期研究从斜纹夜蛾(Spodoptera litura)中肠基因表达序列标签(Expressed sequence tag,EST)文库中,克隆了6个全长的FABPcDNA,其中4个基因结构均由4个外显子与3个内含子组成,这与其他的动物FABP基因结构一致。但Slfabp2不含内含子,而已报道脊椎动物不含内含子的FABP基因是“假基因”。为了进一步研究Slfabp2在斜纹夜蛾是否也是假基因,我们在体外表达和纯化了S/FABP2蛋白,制备了多克隆抗体。通过Western blot分析发现,SlFABP2蛋白在斜纹夜蛾6龄幼虫中肠特异表达,并且在预蛹期达到高峰。用荧光标记物质1,8-ANS(8-苯胺基-1-萘磺酸)分析了重组SlFABP2蛋白与不同脂肪酸结合力,发现SlFABP2可以结合饱和与不饱和长链脂肪酸,包括花生四烯酸、油酸和棕榈酸,表明其可能参与昆虫中肠细胞内脂肪酸的转运。这些结果表明,斜纹夜蛾无内含子的Slfabp2基因在虫体内可以转录和翻译并可以结合底物脂肪酸,是具有功能的基因。由于SlFABP2在不进食的预蛹期及蛹期中肠仍高水平地表达,我们进一步分析了饥饿和蜕皮激素20E对Slfabp2的调节作用。通过RT-PCR与Western blot检测发现,饥饿处理斜纹夜蛾6龄幼虫24小时与48小时后会增加SlFABP2的表达,而20E对6龄不同时期幼虫Slfabp2的表达有一定的抑制作用,尤其是注射20E6h和12h后。SlFABP2在预蛹期中肠高水平表达的调节、机理及生理功能尚需要进一步地研究。
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